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| 大肠杆菌O157:H7 sRNA基因E40缺失突变株的构建 | |
| 引用本文： | 王刚,宋兰,马延,周围,张德礼,岳俊杰,梁龙.大肠杆菌O157:H7 sRNA基因E40缺失突变株的构建[J].生物技术通讯,2010,21(2):175-178. |
| 作者姓名： | 王刚 宋兰 马延 周围 张德礼 岳俊杰 梁龙 |
| 作者单位： | 1. 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071;西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100 2. 军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100071 3. 西北农林科技大学,动物医学院,陕西,杨凌,712100 |
| 摘 要： | 目的:利用Red系统构建肠出血性大肠杆菌O157:H7的sRNA基因E40缺失突变株。方法:选取本实验室预测并经过实验验证的sRNA基因,根据NCBI上相应的序列,设计2对引物分别扩增该sRNA基因的上下游分别长464和455bp的同源臂,经PCR扩增,构建到相应的载体,最后以构建好的含上下游同源臂和卡那霉素抗性基因的长约2500bp的线性片段作为打靶片段,在Red重组系统的作用下与sRNA基因E40的上下游同源区域发生同组,从而把sRNA基因从基因组上置换下来,之后利用质粒pCP20将FRT位点间的卡那霉素抗性基因消除。结果与结论:构建了出血性大肠杆菌O157:H7的sRNA基因E40的缺失突变株,为进一步研究sRNA基因在出血性大肠杆菌O157:H7生长及致病过程中所起的功能奠定了良好的基础。 |
| 关 键 词： | 肠出血性大肠杆菌O157：H7 sRNA Red重组系统 |
Construction of sRNA Gene E40 Deletion Mutant of EHEC O157:H7 |
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| WANG Gang,SONG Lan,MA Yon,ZHOU Wei,ZHANG De-Li,YUE Jun-Jie,LIANG Long.Construction of sRNA Gene E40 Deletion Mutant of EHEC O157:H7[J].Letters in Biotechnology,2010,21(2):175-178. | |
| Authors: | WANG Gang SONG Lan MA Yon ZHOU Wei ZHANG De-Li YUE Jun-Jie LIANG Long |
| Institution: | WANG Gang1,2,SONG Lan1,MA Yan1,ZHOU Wei1,ZHANG De-Li2,YUE Jun-Jie1,LIANG Long1 1.Beijing Institute of Biotechnology,Beijing 100071,2.College of Veterinary Science,Northwest A&F University,Yangling 712100,China |
| Abstract: | Objective:To construct a sRNA gene E40 deletion mutant of enterohemorrhagic E.coli(EHEC) O57:H7 by using Red recombinant system.Methods:Selecting the sRNA gene that predicted and experimental verified by our laboratory,according to the corresponding sequence in NCBI,we designed two pairs of primers to amplify the 464 bp upstream and 455 bp downstream sequence which were homologous to the sRNA gene,then connected to the corresponding vector after PCR amplify.Finally,the constructed liner fragment which conta... |
| Keywords: | H7 sRNA |
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