塑料孔板原位免疫细胞化学、免疫荧光、特染方法的建立

细胞免疫化学、细胞各种特殊染色是我们常用的科研实验方法。常用的是盖玻片爬片染色法[1,2,3],此方法在研究工作中,操作繁琐、片薄易碎、去污不彻底、背景时常不洁净、细胞分布不均易脱落,影响了照片的清晰度。因此,我们一直摸索用塑料孔板原位染色代替盖玻片爬片染色,经过反复实验研究,解决了塑料孔板染色中的固定剂和封片剂两大难题,大大简化了操作过程,提高了染色的质量和实验结果的准确性。现将此方法介绍如下:材料和方法1.材料24孔培养板或6孔培养板4%多聚甲醛配制:4g多聚甲醛溶于PBS中,定容到100ml,存放在密闭容器中,65℃水浴中溶解,溶液4℃保存,两周内使用。封片剂配制:明胶7g溶于蒸馏水25ml温箱溶解,甘油35ml加蒸馏水40ml再加石碳酸0.25mg,二者混匀后温箱加热过滤。2.方法铺板:取对数生长期的细胞,经0.25%胰酶消化制成细胞悬液,计数24孔板铺2×104/ml细胞,6孔培养板2×105/ml细胞。根据孔底面积大小的不同,铺的细胞数也不同,一般以生长2-3d,空白比为50%为好,太稀、太密细胞形态不能充分展现。固定:加培养液2-3d,吸出培养液,用PBS洗一遍,加入4%多聚甲醛1-2ml,固定...