| 牙鲆甲状腺激素受体TRαA的原核表达和多克隆抗体的制备及应用 |
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| 引用本文： | 贾亮,施志仪,张俊玲.牙鲆甲状腺激素受体TRαA的原核表达和多克隆抗体的制备及应用[J].生物工程学报,2009,25(7). |
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| 作者姓名： | 贾亮 施志仪 张俊玲 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学生物技术研究中心,上海,201306 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金,国家教育部博士项目,上海市教委重点科研项目 |
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| 摘 要： | 为研究牙鲆甲状腺激素受体TRαA在牙鲆变态发育过程中的调控作用,将TRαA基因克隆插入融合表达栽体pET30a,并在大肠杆菌Escherichia coli DE3(BL21)中进行诱导表达.表达菌株经1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导4 h后,重组蛋白TRaA表达并形成包涵体.SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物.包涵体经变性后在His-Bind树脂进行亲和层析纯化,柱上复性法对重组蛋白复性,获得纯度较高的目的蛋白,蛋白复性的效果良好.用纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔制备多克隆抗体.Dot blotting检测抗体效价达1:200 000,检测证明抗体特异性良好.此外,通过染色质免疫沉淀技术鉴定了在活体细胞中多克隆抗体与TRαA的特异性结合.表明了甲状腺激素通过其受体在体内参与碱性磷酸酶(ALP)基因的转录调控.
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| 关 键 词： | 牙鲆 甲状腺激素受体TRαA 原核表达 抗体制备 染色质免疫沉淀 |
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