| 吉富罗非鱼源无乳链球菌Sip-GAPDH融合基因的构建及其原核表达 |
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| 引用本文： | 王蓓,李桂欢,鲁义善,汤菊芬,黄郁葱,吴灶和,简纪常.吉富罗非鱼源无乳链球菌Sip-GAPDH融合基因的构建及其原核表达[J].生物技术通报,2014(7). |
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| 作者姓名： | 王蓓 李桂欢 鲁义善 汤菊芬 黄郁葱 吴灶和 简纪常 |
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| 作者单位： | 广东海洋大学水产学院;广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室;广东省水产经济动物病害控制重点实验室;仲恺农业工程学院; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金项目(31302226);广东省科技计划农业攻关项目(2012B020308009);广东省2012年鱼病防治专项(2130108) |
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| 摘 要： | 利用重叠延伸(SOEing)PCR技术,将吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)源无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)ZQ0910株表面免疫原性蛋白(Surface immunogenic protein,Sip)基因与甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因通过Linker序列融合,构建成为Sip-GAPDH融合基因。将其定向克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。结果表明,重组质粒pET-32a-Sip-GAPDH在大肠杆菌BL21(DE3)中表达后所获得的融合蛋白Sip-GAPDH分子量为102.01 kD,表达最佳条件为37℃,IPTG浓度0.1 mmol/L,诱导5 h。Western blot鉴定结果表明融合基因得到了成功表达。
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| 关 键 词： | 无乳链球菌 Sip-GAPDH融合基因 重叠延伸PCR技术 原核表达 |
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