| 云南松基因组微卫星富集文库的构建 |
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| 引用本文： | 许玉兰,张瑞丽,田斌,蔡年辉,康向阳,段安安.云南松基因组微卫星富集文库的构建[J].生物技术通报,2014(1). |
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| 作者姓名： | 许玉兰 张瑞丽 田斌 蔡年辉 康向阳 段安安 |
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| 作者单位： | 北京林业大学林木育种国家工程实验室;西南林业大学国家林业局西南地区生物多样性保育重点实验室; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31260191);云南省自然科学基金项目(2010CD065);云南省省院省校教育合作咨询共建重点学科(211015);云南省教育厅研究生项目(2012J052) |
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| 摘 要： | 采用磁珠富集法构建云南松微卫星富集文库。云南松基因组DNA经RsaⅠ酶切,与特定接头连接,再用接头特异引物进行PCR扩增。连接扩增产物与用生物素标记的(AG)12、(AT)12、(CG)12、(GT)12、(ACG)12、(ACT)12和(CCA)8探针杂交,通过链霉亲和素偶联的磁珠捕捉含接头和微卫星序列的片段并扩增,将获得的片段连接到pMD-19T载体上,转化至大肠杆菌JM109感受态细胞中,成功构建了云南松微卫星富集文库。通过PCR检测从文库中筛选阳性克隆,在383富集阳性菌落中获得阳性克隆257个,经测序分析,在获得的159条序列中,有143条含有SSR,其中完美型占65.73%,非完美型占23.78%,混合型占10.49%。结果表明,磁珠富集法构建云南松基因组微卫星文库高效、可行的,文库的构建为微卫星位点的分离、遗传多样性的分析等奠定基础。
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| 关 键 词： | 云南松 富集文库 微卫星 |
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