| 摘 要： | 该文旨在探讨肝癌细胞HepG2中lncRNA BDNF AS(antisense brain derived neurotrophic factor)对BDNF基因表达的调控作用。将BDNF AS质粒、BDNF AS与BDNF基因完全互补序列缺失突变质粒瞬时转染肝癌细胞HepG2后采用q PCR方法检测肝癌细胞中lncRNA BDNF AS和BDNF mRNA水平;采用Western blot方法检测BDNF蛋白质水平;采用ELISA方法检测细胞培养上清中BDNF蛋白质水平;采用免疫荧光染色检测BDNF蛋白质水平;采用FISH方法检测lncRNA BDNF AS和BDNF mRNA的水平和亚细胞定位。研究结果显示,转染BDNF AS质粒的细胞中,lncRNA BDNF AS水平高于对照组(P0.001),BDNF mRNA和蛋白质水平均低于对照组(P0.001)。转染突变体质粒的细胞中,lncRNA BDNF AS水平高于对照组(P0.05),低于BDNF AS组(P0.001),BDNF mRNA和蛋白质水平低于对照组(P0.05,P0.001),高于BDNF AS组(P0.05,P0.001)。免疫荧光染色发现,转染BDNF AS质粒和转染突变质粒细胞的平均D值均低于同一视野中未转染的其他细胞(P0.05,P0.01)。FISH染色显示,转染BDNF AS质粒的细胞中,BDNF mRNA在细胞中分布的核/质比低于对照组(P0.001);转染突变质粒的细胞中,BDNF mRNA在细胞中分布的核/质比低于对照组(P0.05),高于lncRNA BDNF AS过表达的细胞(P0.05)。该研究结果表明,肝癌细胞HepG2中lncRNA BDNF AS过表达下调BDNF mRNA和蛋白质水平,二者基因完全互补序列参与lncRNA BDNF AS对BDNF基因表达的调控作用。
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