高GC含量基因NADK2的扩增及其真核表达载体的构建

在构建线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶(mitochondrial nicotinamide adenine dinucleotide kinase,NADK2)真核表达载体时,该文发现,使用Ex Taq DNA聚合酶扩增无法得到其编码区域全长,5′端缺失一段DNA片段。对其cDNA序列进行分析发现,NADK2编码区GC含量不均衡。起始密码子附近GC含量最高可达92.5%,而3′端终止密码子附近GC含量最低只有27.5%。之后,使用LA Taq及GC缓冲液进行扩增,得到了NADK2基因ORF(open reading frame)全长,并克隆入真核表达载体。该文结果对类似高GC含量DNA片段的PCR扩增有一定的提示作用。