| 大肠杆菌CMP-唾液酸合成酶最小活性域的研究 |
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| 引用本文： | 金春生,金城.大肠杆菌CMP-唾液酸合成酶最小活性域的研究[J].生物工程学报,2002,18(6). |
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| 作者姓名： | 金春生 金城 |
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| 作者单位： | 中国科学院微生物研究所资源前期开发国家重点实验室 北京 100080 |
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| 基金项目： | 中国科学院知识创新工程项目，国家攀登计划 |
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| 摘 要： | 比较大肠杆菌与脑膜炎奈瑟氏球菌的CMP-唾液酸合成酶的氨基酸序列，发现大肠杆菌CMP-唾液酸合成酶的保守区域主要位于N-端，其C-末端似乎对其催化活性没有作用。通过PCR方法，对大肠杆菌CMP唾液酸合成酶的C-末端进行了一系列截短，将得到的产物连接至表达载体pET-15b中，在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中表达。经IPTG诱导，发现从C-末端截去189个氨基酸酶仍有催化活性，说明大肠杆菌CMP唾液酸合成酶的最小活性域主要集中在N-末端的229个氨基酸。有催化活性的C-端缺失突变合成酶的比活、最适pH及热稳定性发生变化，提示被截去的C-端氨基酸残基虽不直接参与构成酶的催化活性中心，但可影响催化活性域的构象，从而对酶的催化活性与稳定性产生影响。
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| 关 键 词： | 唾液酸， CMP-唾液酸合成酶， 截短 |
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