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苯丙氨酸解氨酶在催化反式苯丙烯酸向L-苯丙氨酸转化中新的稳定作用
作者姓名:Christopher T.Evans  Dayle Canrad  Kin Hanna  李广武
作者单位:武汉大学生物系
摘    要:用分离株SPA1O从反式苯丙烯酸生产的L-辈丙氨酸产量减少到起初观测的26%,起初的实验是生产菌与新鲜底物二次作用而进行的。含苯丙氨酸解氨酶细胞的稳定性(再用可能性)明显地受反式苯丙烯酸盐的浓度和最初反应pH的影响。使用2%的反式苯丙烯酸盐,L-苯丙氨酸的产量在PH9.0连续培养3次后比在最适pH10.2时的产量大7倍。细胞在存在有5%的反式苯丙烯酸盐时的作用相当不稳定。渗透因子,如甲苯、二甲苯能促进L-本丙氨酸的合成量,但同时也会增加苯丙氨酸解氨酶的不稳定性。有几种效应物表明对苯丙氨酸解氨酶的起始转化速率起促进作用,但只有山梨醇,藻酸盐,戌二醛,聚乙二醇和甘油使其具一定程度的稳定性。用不同的气体对培养物和生物反应器进行通气搅动,表明氧气促进苯丙氨酸解氨酶失活,二氧化碳有少的影响,而氮气使苯丙氨酸解氨酶活性在培养基中几个星期都具明显的稳定性。氯离子的存在(来自HCl)以及底物的通气搅动降低酶的再用可能性,用硫酸取代盐酸,并用氮气进行通气搅动,在26℃时,导致极好的最初转化速率,并且酶活相当稳定,但在30℃时效果差些,反应物中含有1.5M山梨醇使苯丙氨酸解氨酶活性稳定连续维持几个培养周期。

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