Zur Frage der Beziehungen zwischen Substantia granulofilamentosa und Krinom

Zusammenfassung In dieser ersten von insgesamt drei Studien über die Beziehungen zwischen Substantia granulofilamentosa und Krinom wurden am Blut Phenylhydrazin-vergifteter Meerschweinchen 57 kationische Farbstoffe verschiedener chemischer Struktur und ausgewählte basische Stoffe ohne Farbstoffcharakter auf ihre Eignung geprüft, die Substantia granulofilamentosa auszufällen und gegebenenfalls hinsichtlich der Art der Ausfällung individuelle, vor allem morphologische Merkmale erkennen zu lassen.Von den 57 Farbstoffen waren 36, vorwiegend die hauptsächlich untersuchten Derivate von Heterocyclen des Anthracens, zur Darstellung der Substantia granulofilamentosa geeignet. Zu den erstmals für die Rc-Darstellung als brauchbar erkannten Farbstoffen gehören Methylengrün, Toluylenblau, Pseudoisocyanin, Neutralviolett und Amethystviolett.Auch in einigen Alkaloiden in hoher Konzentration, insbesondere mit Chinin, gelingt die Präzipitation einer netzförmigen, basophilen Struktur, die allerdings nicht die gleiche Dichte und Farbstoffaffinität aufweist, wie die von guten Farbstoffen ausgefällte Substantia granulofilamentosa.Bei intensiv mit Phenylhydrazin behandelten Meerschweinchen wurde Spontanentmischung der basophilen Substanz der Rc bereits in den Kontrollpräparaten beobachtet.Die Mehrzahl der positiven Farbstoffe gehört ihrer chemischen Struktur nach zu den Heterocyclen des Anthracens. — Ursachen negativer Resultate der Rc-Markierung werden besprochen.Quantitative Beziehungen zwischen Änderungen der Farbstoffkonzentration und den Rc-Zahlen wurden vergleichend am Beispiel äquimolarer Lösungen von Acridinorange, 9-Aminoacridin, Neutralrot und Chinin untersucht. In dieser Reihenfolge geht die Wirksamkeit der vier Substanzen bei abnehmender Konzentration zurück.Nach Einwirkung konzentrierter (1100) geeigneter Farbstoffe auf Blutzellen zeigt die Struktur der in Rc ausgefällten Substantia granulofilamentosa gewisse farbstoffabhängige Eigenarten.Einige dieser Eigentümlichkeiten in der Darstellung der Substantia granulofilamentosa werden beschrieben. Typisch z. B. für Derivate des Acridins ist das Bild der dichten zentralen Zusammenballung der basophilen Substanz im May-Grünwald-Giemsa-nachgefärbten Präparat.Mit einigen positiven Farbstoffen (Konzentration 12000) wird in Rc das Phänomen der Vakuolenbildung, welches direkte Beziehungen zur Krinombildung hat, hervorgerufen. Die meisten Farbstoffe werden bei dieser Konzentration in Vakuolen konzentriert. Pyronin ist nur zur Darstellung der Substantia granulofilamentosa geeignet.In Froscherythrocyten vermögen Farbstoffe der Gentianaviolett-Gruppe die Substantia granulofilamentosa nicht auszufällen.Aus Vergleichsgründen wird die gleiche Farbstoffauswahl auch hinsichtlich ihrer Affinität zu den chemisch andersartig aufgebauten Heinz-Körpern untersucht. Die Heinz-Körper werden besonders intensiv mit Farbstoffen der Gentianaviolett-Gruppe und mit Oxazin angefärbt. Sie zeigen ziemlich intensiv Primärfluoreszenz, nach Einwirkung verschiedener Fluorochrome Sekundärfluoreszenz.Gesichtspunkte der Beziehungen zwischen chemischer Struktur der untersuchten Farbstoffe und ihren Wirkungen auf Rc werden besprochen.

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Summary This is the first of three studies on the relationship between Substantia granulofilamentosa and crinoma. Using the blood of phenylhydrazine-poisened guinea pigs, 57 cationic dyes of various chemical structures and selected basic substances of nondye character, are tested for their suitability to precipitate the substantia granulofilamentosa. Attention is paid to the various types of precipitates in order to find out whether they show individual morphologic features. Out of 57 dyes, 36—most of which are derivatives of heterocyclic anthracene — are suitable for the demonstration of the substantia granulofilamentosa. The group of dyes, which for the time ever have been used successfully for the demonstration of reticulocytes, includes: methylene green, toluylene blue, pseudo-isocyanine, neutral violet, and amethyst violet.After treatment with certain alkaloids in high concentrations (especially quinine) a reticular basophil structure is precipitated. It shows, however, not the same density and affinity for dyes as the precipitates, obtained with good dyes. In guinea pigs, treated with high doses of phenylhydrazine, a spontaneous segregation of the basophil substance of the reticulocytes is already observed in the controls. According to their chemical structures, the majority of posiive dyes belong to the heterocyclic anthracenes. — The reasons for negative results in the demonstration of reticulocytes are discussed. Quantitative relationships between dye concentration and number of reticulocytes are tested with equimolar solutions of acridine-orange, 9-amino acridine, neutral red, and quinine. The efficacy of these four substances decreases with decreasing concentration in the order given above. If blood cells are treated with a concentrated solution (1100) of suitable dyes, certain dye-dependent peculiarities are observed in the precipitated substantia granulofilamentosa, some of which are described in detail. A typical picture after treatment with acridine derivatives is — for example — a dense central conglomerate of the basophil substance, found after additional staining with May-Grünwald-Giemsa. Some positive dyes (concentration 12000) cause the formation of vacuoles in reticulocytes, which stands in direct relation to the formation of the crinoma. If used at this concentration most of the dyes are concentrated in vacuoles. Pyronine is suitable only for the demonstration of the substantia granulofilamentosa.Dyes that belong to the gentian violet group, are not suitable for the precipitation of the substantia granulofilamentosa in frog erythrocytes.For comparative reasons the same group of dyes is tested for its affinity to the Heinz bodies, which chemically are very different from the substantia granulofilamentosa. Heinz bodies are intensely stained with dyes belonging to the gentian violet group and by oxazine dyes. A rather intensive primary fluorescence is observed in Heinz bodies; if several fluorochromes are used, they show secondary fluorescence. The relation between the chemical structure of the dyes used in this study and their effect on reticulocytes is discussed.

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In der Arbeit werden die folgenden Abkürzungen verwendet FS Farbstoff(e) - HK Heinz-Körper - MGG May-Grünewald-Giemsa Färbung - Rc Reticulocyt(en) - RNP Ribonucleoproteide - DNS Desoxyribonucleinsäure - SGF Substantia granulofilamentosa