| 聚苹果酸聚合途径中苹果酰辅酶A连接酶基因的克隆、表达及酶学性质 |
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| 引用本文： | 吴小燕,周峰,涂光伟,邹祥.聚苹果酸聚合途径中苹果酰辅酶A连接酶基因的克隆、表达及酶学性质[J].微生物学报,2014,54(8):919-925. |
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| 作者姓名： | 吴小燕 周峰 涂光伟 邹祥 |
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| 作者单位： | 西南大学药学院，重庆400715;西南大学药学院，重庆400715;西南大学药学院，重庆400715;西南大学药学院，重庆400715 |
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| 基金项目： | 国家863计划项目(2014AA021205);中央高校基本科研业务费专项资金(XDJK2013B039);重庆药物过程与质量控制工程技术研究中心能力提升项目(CSTC2012 gg-yyjsb10002-33) |
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| 摘 要： | 【目的】研究出芽短梗霉聚苹果酸聚合途径中苹果酰辅酶A连接酶基因及其酶学特性。【方法】通过设计兼并引物,采用IPCR技术从出芽短梗霉CCTCC M2012223的基因组中扩增得到苹果酰辅酶A连接酶基因的cDNA全长序列,构建表达载体,通过大肠杆菌异源表达,Ni-NTA柱层析纯化酶蛋白,分析其酶学特性。【结果】获得苹果酰辅酶A连接酶基因序列全长为1498 bp,编码440 aa,含有4个外显子和3个内含子。该重组酶最适反应温度为25℃,最适反应pH值为8.0,高浓度底物ATP明显对酶活性具有抑制作用,单体选择性表明对底物草酸、草酰乙酸、丁酸、丙二酸也具有很好催化活性。【结论】成功从出芽短梗霉CCTCC M2012223中克隆获得聚苹果酸聚合途径的苹果酰辅酶A连接酶基因,为聚苹果酸聚合途径解析及新型可降解材料创制奠定基础。
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| 关 键 词： | 出芽短梗霉 苹果酰辅酶A连接酶基因 聚合途径 单体选择性 |
| 收稿时间： | 2014/1/30 0:00:00 |
| 修稿时间： | 4/3/2014 12:00:00 AM |
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