| 副溶血弧菌ToxR截短体蛋白的表达纯化及其DNA结合活性 |
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| 引用本文： | 胡小许,张义全,黄倩,王丽,杨瑞馥,黎晓敏,周冬生,钟青萍.副溶血弧菌ToxR截短体蛋白的表达纯化及其DNA结合活性[J].微生物学报,2014,54(8):956-961. |
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| 作者姓名： | 胡小许 张义全 黄倩 王丽 杨瑞馥 黎晓敏 周冬生 钟青萍 |
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| 作者单位： | 华南农业大学食品学院，广东广州510642;北京军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071;西南大学动物科技学院，重庆400715;北京军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071;北京军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071;西南大学动物科技学院，重庆400715;北京军事医学科学院微生物流行病研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室，北京100071;华南农业大学食品学院，广东广州510642 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31271956，31170127) |
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| 摘 要： | 【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3表达系统,表达出有活性的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)ToxR截短体蛋白,为进一步研究ToxR的转录调控机制奠定基础。【方法】以VP基因组DNA为模板,PCR扩增ToxR蛋白DNA结合结构域(ToxR-N)的DNA片段,并将其直接克隆入pET28a中,获得重组质粒;将重组质粒导入大肠杆菌BL21λDE3中,所得菌株经IPTG诱导后能表达出His-ToxR-N蛋白。利用限制级凝血酶切除His-ToxR-N中的His-标签,进而以VP的calR和VP1687为靶基因,通过体外的凝胶阻滞实验(EMSA)验证ToxR-N蛋白的DNA结合活性。分别构建克隆有calR和VP1687上游启动子区的LacZ重组质粒,并将重组质粒转入野生株(WT)和toxR突变株(ΔtoxR)中,通过测定β-半乳糖苷酶活性来比较两株重组菌中靶基因启动子活性,以验证ToxR对calR和VP1687的调控关系。【结果】成功表达出有活性的ToxR-N蛋白,该蛋白对calR启动子区具有结合活性。LacZ结果显示ToxR对calR的转录具有激活作用,而对VP1687的转录具有抑制作用。【结论】所表达的ToxR-N可用于后续的转录调控机制研究;ToxR通过直接激活calR的转录表达,而间接抑制T3SS1相关基因的表达。
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| 关 键 词： | 副溶血弧菌 ToxR DNA结合活性 转录调控 |
| 收稿时间： | 2013/10/23 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2014/1/27 0:00:00 |
Purification and DNA-binding of ToxR truncated protein of Vibrio parahaemolyticus |
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| Xiaoxu Hu,Yiquan Zhang,Qian Huang,Li Wang,Ruifu Yang,Xiaomin Li,Dongsheng Zhou and Qingping Zhong.Purification and DNA-binding of ToxR truncated protein of Vibrio parahaemolyticus[J].Acta Microbiologica Sinica,2014,54(8):956-961. |
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| Authors: | Xiaoxu Hu Yiquan Zhang Qian Huang Li Wang Ruifu Yang Xiaomin Li Dongsheng Zhou and Qingping Zhong |
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