| 原玻璃蝇节杆菌D-氨基酸氧化酶及突变体的酶学特性 |
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| 引用本文： | 冯利伟,郭姣洁,李辉欣,徐书景,鞠建松,赵宝华. 原玻璃蝇节杆菌D-氨基酸氧化酶及突变体的酶学特性[J]. 微生物学报, 2014, 54(8): 897-904 |
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| 作者姓名： | 冯利伟 郭姣洁 李辉欣 徐书景 鞠建松 赵宝华 |
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| 作者单位： | 河北师范大学生命科学学院，河北石家庄050024;石家庄科技信息职业学院，河北石家庄052165;河北师范大学生命科学学院，河北石家庄050024;河北师范大学生命科学学院，河北石家庄050024;河北师范大学生命科学学院，河北石家庄050024;河北师范大学生命科学学院，河北石家庄050024 |
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| 基金项目： | 河北省自然科学基金(C2011205045);河北省科技支撑项目(10205521D);河北省留学回国人员资助项目(20100705);河北省高等学校科学技术研究青年基金项目(2011102);河北师范大学重点基金项目(L2012Z12，L2009B13) |
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| 摘 要： | 【目的】研究原玻璃蝇节杆菌(DSM 20168)中D-氨基酸氧化酶的酶学特性。【方法】通过PCR从原玻璃蝇节杆菌(DSM 15035,20168)中克隆获得D-氨基酸氧化酶基因apdaao-1和apdaao-2,构建原核表达载体,以表达质粒pET-ApDAAO-2为模板,采用QuickChange Site-Directed Mutagenesis技术构建定点突变体,经过原核表达及纯化获得重组型和突变体酶蛋白,分析其酶学特性。【结果】通过原核表达及纯化成功获得了2个重组蛋白和4个突变体酶蛋白,SDS-PAGE检测显示其分子量均约为36 kDa;酶学特性分析表明,ApDAAO-2和突变体蛋白的最适反应温度为30℃;ApDAAO-2和T286A的最适反应pH范围为7.0-11.0,其它突变体为8.0-11.0;ApDAAO-2和突变体都具有较广泛的底物特异性,除T256K的最适底物为D-Phe外,其余均为D-Met;动力学参数测定结果显示,以二级表观常数kcat/Km表示,对于底物D-Met或D-Phe,ApDAAO-2和4个突变体的kcat/Km值均比ApDAAO-1和pKDAAO高数倍以上。【结论】ApDAAO-2及突变体具有比ApDAAO-1和pKDAAO更广泛的底物特异性和较高的催化效率,有一定的商业应用价值。
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| 关 键 词： | 原玻璃蝇节杆菌 D-氨基酸氧化酶 定点突变 二级表观常数 |
| 收稿时间： | 2013-10-20 |
| 修稿时间： | 2013-12-13 |
Characterization of D-amino acid oxidase and its mutants from Arthrobacter protophormiae |
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| Liwei Feng,Jiaojie Guo,Huixin Li,Shujing Xu,Jiansong Ju and Baohua Zhao. Characterization of D-amino acid oxidase and its mutants from Arthrobacter protophormiae[J]. Acta microbiologica Sinica, 2014, 54(8): 897-904 |
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| Authors: | Liwei Feng Jiaojie Guo Huixin Li Shujing Xu Jiansong Ju Baohua Zhao |
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