| 天蓝色链霉菌孢子色素whiE在大肠杆菌中的异源生物合成 |
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| 引用本文： | 赵宇春,刘向阳,邓子新,贺新义,蒋明.天蓝色链霉菌孢子色素whiE在大肠杆菌中的异源生物合成[J].微生物学报,2021,61(10):3173-3184. |
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| 作者姓名： | 赵宇春 刘向阳 邓子新 贺新义 蒋明 |
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| 作者单位： | 上海交通大学生命科学技术学院, 微生物代谢国家重点实验室, 上海 200030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（31870026，31300033，21661140002）；国家重大研发计划（2018YFA0900402）；中科院生命有机化学国家重点实验室开放基金 |
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| 摘 要： | 【目的】在大肠杆菌中完整重构孢子色素whiE的生物合成途径,分离纯化表达体系中合成的新化合物,并解析whiE的生物合成途径。【方法】构建whiE-ORFII、whiE-ORFVII和whiE-ORFI的单基因重组质粒,SDS-PAGE检测蛋白表达情况;借助Xba I与Spe I互为同尾酶的特性,实现多基因组合串联;构建好的重组质粒再导入大肠杆菌菌株BAP1中进行异源表达,并用高效液相色谱(HPLC)检测发酵产物;依次使用正相硅胶柱和反向半制备柱分离发酵产物,四级杆飞行时间质谱仪(Q-TOFMS)鉴定发酵产物分子量。【结果】whiE-ORFII、whiE-ORFVII和whiE-ORFI均获得可溶性表达;这3个基因单个串联到菌株BTw95中均未检测到新的产物生成;而whiE-ORFII和whiE-ORFVII、 whiE-ORFI和whiE-ORFVII双基因组合以及三基因组合串联到BTw95中可检测得到两种化合物ZYC-1和ZYC-2。在负离子模式下进行Q-TOFMS检测,ZYC-1的M-H]-为419.0748,推测分子式为C_(23)H_(16)O_8;ZYC-2的M-H]-为465.0743,推测分子式为C_(24)H_(18)O_(10)。【结论】本研究推进了孢子色素whiE生物合成途径在大肠杆菌中的异源重构,分离鉴定了2个十二酮II型聚酮化合物,并推测了孢子色素whiE的生物合成途径。
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| 关 键 词： | 孢子色素whiE 大肠杆菌 异源生物合成 II型聚酮化合物 |
| 收稿时间： | 2020/12/13 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2021/1/20 0:00:00 |
Heterologous biosynthesis of spore pigment whiE from Streptomyces coelicolor in Escherichia coli |
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| Yuchun Zhao,Xiangyang Liu,Zixin Deng,Xinyi He,Ming Jiang.Heterologous biosynthesis of spore pigment whiE from Streptomyces coelicolor in Escherichia coli[J].Acta Microbiologica Sinica,2021,61(10):3173-3184. |
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| Authors: | Yuchun Zhao Xiangyang Liu Zixin Deng Xinyi He Ming Jiang |
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| Institution: | State Key Laboratory of Microbial Metabolism, School of Life Sciences and Biotechnology, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200030, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | spore pigment whiE Escherichia coli heterologous biosynthesis type II polyketide |
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