过表达PDI对毕赤酵母分泌淀粉样蛋白的影响——以胱抑素为例

目的] 本研究旨在结合酵母菌蛋白质二硫键异构酶（protein disulfide isomerase，PDI）与其底物蛋白鸡胱抑素C （chicken cystatin C，cC）在酵母中的共表达，理解PDI影响外源蛋白合成与表达的调控规律。运用转录组深度测序技术（RNA-Seq）筛选差异基因，调取并鉴定影响cC表达的关键基因，为解析外源蛋白高效表达机制，改造工程菌株提供理论支撑。方法] 以巴斯德毕赤酵母GS115、GS115-cC为出发菌株，采用电转的方法将携带PDI编码基因的载体pPIC3.5K转入到GS115/GS115-cC菌株，使其在菌株中过表达，研究过表达PDI对cC表达的影响。采用RNA-Seq深度测序方法，研究重组毕赤酵母基因表达差异情况。并结合KEGG注释结果对数据进行分析，挑选差异显著表达基因进行验证，初步明确其在蛋白表达调控方面的功能。结果] 本研究通过构建过表达PDI重组毕赤酵母菌株，使得外源蛋白cC的表达量显著增加。利用RNA-seq技术分析过表达PDI菌株与正常菌株的差异，最终筛选了373个差异表达基因，其中有122个差异基因注释到KEGG生物通路，包括12个基因注释到蛋白质转运和分解代谢途径，21个基因注释到蛋白质折叠分选和降解途径，以及24个基因参与蛋白质的翻译途径等。结论] 在毕赤酵母中过表达PDI能显著增加外源蛋白cC的表达量。通过对过表达与正常表达PDI的毕赤酵母基因的表达谱分析，初步确定了其中一些转录情况变化显著的基因，明确了它们参与的细胞途径和信号通路，为改造具有高效率表达淀粉样蛋白的酵母菌株奠定基础。