| 角蛋白酶基因gm2886在密旋链霉菌ACT12中的表达及鉴定 |
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| 作者姓名： | 马怡茗 柯欣 李晓霞 舒伟学 杨文翰 刘亚勇 颜霞 贾良辉 颜华 |
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| 作者单位： | 1 西北农林科技大学 生命科学学院,陕西 杨凌 712100,1 西北农林科技大学 生命科学学院,陕西 杨凌 712100,1 西北农林科技大学 生命科学学院,陕西 杨凌 712100,1 西北农林科技大学 生命科学学院,陕西 杨凌 712100,1 西北农林科技大学 生命科学学院,陕西 杨凌 712100,2 中国科学院微生物研究所,北京 100101,1 西北农林科技大学 生命科学学院,陕西 杨凌 712100,1 西北农林科技大学 生命科学学院,陕西 杨凌 712100,1 西北农林科技大学 生命科学学院,陕西 杨凌 712100 |
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| 基金项目： | 陕西省农业科技创新与攻关 (No. 2015NY066),上海交通大学微生物代谢国家重点实验室开放基金 (No. MMLKF14-09),中央高校基本科研业务费 (Nos. Z109021426,Z109021432),国家自然科学基金 (No. 31601700) 资助。 |
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| 摘 要： | 通过生物信息学分析,在本实验室分离得到的1株羽毛高效降解菌微白黄链霉菌Fea-10基因组中发现基因gm2886(GenBank Accession Number:KY368946)可能编码一新的角蛋白酶,通过在该基因5'端和3'端分别连接红霉素抗性基因启动子(PermE)和组氨酸标签编码序列并构建在大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒pSET152上,接合转入密旋链霉菌Streptomyces pactum ACT12,从而实现了异源表达,蛋白纯化后对其酶学性质进行了研究。实验结果表明,带有组氨酸标签编码序列的gm2886在密旋链霉菌ACT12中可以表达分泌得到1个大小约为36 kDa的蛋白。多种底物检测表明异源表达得到的重组蛋白GM2886-His6具有蛋白酶活性,可以降解水不溶性的天青角蛋白和羽毛粉;其最适温度和pH分别为50℃和pH 10.0。PMSF可抑制GM2886-His6的酶活,而EDTA不能,说明该酶为丝氨酸蛋白酶。本研究为从分子水平上解析羽毛高效降解菌Fea-10的活性机理,从而进一步开发其应用潜力提供了基础,同时可为该类蛋白酶的研究提供借鉴。
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| 关 键 词： | 角蛋白酶 微白黄链霉菌Fea-10 密旋链霉菌 异源表达 重组酶 |
| 收稿时间： | 2017-03-01 |
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