| 猪细胞因子SYBR Green实时PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 冯志新,姜平. 猪细胞因子SYBR Green实时PCR检测方法的建立[J]. 现代生物医学进展, 2007, 7(1): 108-111 |
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| 作者姓名： | 冯志新 姜平 |
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| 作者单位： | 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室,南京,210095 |
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| 基金项目： | 教育部新世纪优秀人才支持计划;江苏省自然科学基金;国家自然科学基金;教育部科学技术研究项目 |
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| 摘 要： | 目的:建立一种用SYBR Green荧光染料检测猪细胞因子的实时PCR方法。方法:从猪外周血淋巴细胞中提取细胞因子mRNA,反转录成cDNA,利用SYBR Green荧光染料法实时检测IL8、IL10、IFNα、IFN(?)和TNFα的mRNA表达水平。分别通过融解曲线和琼脂糖凝胶电泳分析各细胞因子检测的特异性;并对各细胞因子PCR产物进行梯度稀释后作为模板进行敏感性试验;利用建立的方法分别对正常猪和感染PRRSV的猪的外周血淋巴细胞中上述细胞因子进行检测,并以管家基因cyclophilin为内参照对各细胞因子进行定量分析。结果:建立的各细胞因子SYBR Green实时检测方法具有良好的特异性和敏感性,TNFα检测敏感性可达10个拷贝,其它细胞因子检测敏感性均可达100个拷贝。猪在感染PRRSV后,外周血淋巴细胞中IL8和IL10明显增加,而IFNα和TNFα略有下降。结论:建立了五种猪细胞因子SYBR Green实时PCR检测方法,并能成功地应用于临床检测。
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| 关 键 词： | 实时PCR 细胞因子 猪 |
| 文章编号： | 24081147 |
| 修稿时间： | 2006-10-13 |
Development of SYBR Green real-time PCR for Detecting Porcine Cytokines |
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| FENG Zhi-xin,JIANG Ping. Development of SYBR Green real-time PCR for Detecting Porcine Cytokines[J]. Progress in Modern Biomedicine, 2007, 7(1): 108-111 |
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| Authors: | FENG Zhi-xin JIANG Ping |
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| Affiliation: | Key Laboratory of Animal Disease Diagnostic and Immunology, Ministry of Agriculture, Nanjing Agricultural University, Nanjing, 210095 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | SYBR Green |
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