麦迪霉素4〃酰化酶基因的克隆及在螺旋霉产生菌中的表达

从含麦迪霉素生物合成基因⑴的初级克隆pCN6C5中，发现并分离了麦迪霉素4〃酰化酶基因，与质粒载体plJ680相连，获得重组质粒p66B，在螺旋霉素产生菌中得到表达，其主要产物为4〃异戍酰螺旋霉素。以p66B DNA BamHI—BamHI2．3kb插入片段为探针，从麦迪霉素产生菌基因文库中获得了另一阳性克隆pcNlOF5，southern分子杂交确定pcNlOF5BamHI—Bamm 8．Okb为同源片段。以pwHM3及pJJ680为载体，获得重组质粒pwF5及p6F5，分子大小分别为15．2kb及13．3kb。通过DNA转化，并经分子杂交实验证明，获得含重组质粒的螺旋霉素产生菌克隆菌株。其主要产物经分离、纯化后，分析其理化性质和光谱数据，鉴定为丙酰螺旋霉素Ⅲ和Ⅱ。研究还表明，麦迪霉素基因文库中只有pcNl0F5DNA与碳霉素产生菌的4〃异戊酰化酶基因同源，提示pcN6c5克隆携带的麦迪霉素4〃酰化酶基因与pcNlOF5的4〃丙酰化酶基因及碳霉素4〃异戊酰化酶基因有一定的区别。