| 重组人神经生长因子rh-β-NGF真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达 |
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| 作者姓名： | 李景传 薛博夫 袁媛 马墨 朱林 Rebecca Milburn 李乐 胡沛臻 叶菁 |
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| 作者单位： | 1 第四军医大学基础部病理教研室，陕西 西安 710032,2 深圳市港科深研生物科技有限公司，广东 深圳 518067,1 第四军医大学基础部病理教研室，陕西 西安 710032,2 深圳市港科深研生物科技有限公司，广东 深圳 518067,2 深圳市港科深研生物科技有限公司，广东 深圳 518067,2 深圳市港科深研生物科技有限公司，广东 深圳 518067,1 第四军医大学基础部病理教研室，陕西 西安 710032,1 第四军医大学基础部病理教研室，陕西 西安 710032,1 第四军医大学基础部病理教研室，陕西 西安 710032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (Nos. 81101711, 81101752)，重大新药创制科技重大专项 (No. 2009ZX09102-226) 资助。 |
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| 摘 要： | 为大量制备β-NGF,构建了一种稳定、高效表达重组人神经生长因子(Recombinant human nerve growth factor,rh-β-NGF)的真核表达载体及含该重组载体的HEK293细胞株。首先,构建重组质粒p CMV-β-NGF-IRES-dhfr并转染至HEK293细胞系,用MTX加压筛选和有限稀释法进行选择,获得高效表达rh-β-NGF的单克隆重组细胞株;随后逐步降低血清培养,最终使细胞株完全适应无血清培养基并稳定表达rh-β-NGF;SDS-PAGE分析该表达产物,可见相对分子质量约13 k Da的条带,纯度大于50%,经质谱法测定得到其肽图谱与理论序列完全匹配,接着利用离子交换层析和分子筛层析纯化rh-β-NGF;最后进行重组细胞株表达效率和表达稳定性检测,表明重组细胞株可稳定、高效表达rh-β-NGF,其分泌效率大于20 pg/(cell?d),并能诱导PC12细胞的分化,具有良好的生物学活性。
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| 关 键 词： | 重组，神经生长因子，真核载体，HEK293细胞，活性鉴定 |
| 收稿时间： | 2014-05-13 |
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