| 毕赤酵母高效分泌长效人生长激素的研究 |
| |
| 引用本文： | 戚楠,张艳红,吴军,马清钧. 毕赤酵母高效分泌长效人生长激素的研究[J]. 中国生物工程杂志, 2012, 32(12): 37-46 |
| |
| 作者姓名： | 戚楠 张艳红 吴军 马清钧 |
| |
| 作者单位： | 1. 安徽医科大学基础医学院 合肥 230022;2. 军事医学科学院生物工程研究所 北京 100850 |
| |
| 摘 要： | 目的:为了延长人生长激素(HGH)在血浆中的半衰期,构建了高效分泌表达人血清白蛋白(HSA)与HGH融合蛋白(HSA-HGH)的工程毕赤酵母菌株。方法:从人胎肝cDNA文库中扩增HSA基因,从HGH工程菌载体中扩增HGH基因,将其克隆至真核表达载体pHIL-D2,载体线性化后采用电击法转化毕赤酵母GS115。通过原位双层膜法筛选高效分泌表达菌株。分别采用SDS-PAGE和Western印迹鉴定融合蛋白。对工程酵母培养条件进行研究,发酵液经离子交换层析、亲和层析和分子筛层析纯化。纯化的蛋白经N端序列测定,分子量测定和等电聚焦电泳进行鉴定。冻干的蛋白制剂经食蟹猴试验进行药代动力学和药效动力学测试。结果:确立了工程酵母的最佳培养工艺,融合蛋白表达量达100mg/L。纯化后蛋白纯度达95%以上,得率达42%。融合蛋白与预期结果一致,经食蟹猴试验,显示有良好的生物活性,与等摩尔剂量的重组人生长激素相比,半衰期延长6.8倍,清除率慢44倍。结论:融合蛋白呈现明显的长效动力学特征,为开发重组长效人生长激素HSA-HGH融合蛋白药物(rHSA-HGH)奠定了基础。
|
| 关 键 词： | HGH HSA 融合蛋白 半衰期 毕赤酵母 |
| 收稿时间： | 2012-06-21 |
Efficient Expression and Secretion of a Long-acting Form of Human Growth Hormone in Pichia pastoris |
| |
| QI Nan,ZHANG Yan-hong,WU Jun,MA Qing-jun. Efficient Expression and Secretion of a Long-acting Form of Human Growth Hormone in Pichia pastoris[J]. China Biotechnology, 2012, 32(12): 37-46 |
| |
| Authors: | QI Nan ZHANG Yan-hong WU Jun MA Qing-jun |
| |
| Affiliation: | 1 Department of Biochemistry and Molecular Biology,Anhui Medical University,Hefei 230022,China)(2 Institute of Biotechnology,Academy of Military Medical Sciences,Beijing 100850,China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | HSA HGH Fusion protein Half-life Pichia pastoris |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国生物工程杂志》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《中国生物工程杂志》下载全文 |
|
