| (S)-酮基布洛芬拆分用脂肪酶基因的克隆及表达 |
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| 引用本文： | 许丽娟,赵玉红,刘瑞恩,赵运英,张金红.(S)-酮基布洛芬拆分用脂肪酶基因的克隆及表达[J].生物工程学报,2010,26(1):108-113. |
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| 作者姓名： | 许丽娟 赵玉红 刘瑞恩 赵运英 张金红 |
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| 作者单位： | 南开大学生命科学学院; |
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| 基金项目： | 天津市自然科学基金项目(No.05YFJMJC01100)资助~~ |
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| 摘 要： | 本实验室筛选出一株具有不对称拆分消旋酮基布洛芬氯乙酯的菌株NK13为材料,经鉴定为巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium。通过构建其基因文库,从中筛选得到阳性克隆重组子pUC-NK1。测序分析表明,该重组子质粒中包含一长度为633bp的脂肪酶基因的完整开放阅读框,核苷酸同源性对比证明该脂肪酶基因属首次发现(GenBank Accession No.EU381317),将此基因克隆到原核表达载体pET21b(+)中构建重组表达质粒pET-NKest1,转化Escherichia coli BL21,经Isopropyl-β-D-Thiogalactoside(IPTG)诱导在宿主菌中得到表达,经SDS-PAGE电泳检测证明该脂肪酶成熟蛋白分子量约为20kDa。薄层层析与HPLC检测结果显示,表达菌株转化外消旋酮基布洛芬氯乙酯得到(S)-酮基布洛芬过量(e.e.%),由野生菌NK13的5.84%提高到75.28%,提高约15倍,说明该脂肪酶具有优先拆分得到(S)-酮基布洛芬的特性。
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| 关 键 词： | 不对称拆分 （S）-酮基布洛芬 脂肪酶 克隆 表达 |
| 收稿时间： | 7/3/2009 12:00:00 AM |
Cloning and expression of lipase gene to enantioselective resolution of (S)-ketoprofen |
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| Lijuan Xu,Yuhong Zhao,Ruien Liu,Yunying Zhao and Jinhong Zhang.Cloning and expression of lipase gene to enantioselective resolution of (S)-ketoprofen[J].Chinese Journal of Biotechnology,2010,26(1):108-113. |
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| Authors: | Lijuan Xu Yuhong Zhao Ruien Liu Yunying Zhao and Jinhong Zhang |
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| Institution: | College of Life Science of Nankai University, Tianjin 300071, China;College of Life Science of Nankai University, Tianjin 300071, China;College of Life Science of Nankai University, Tianjin 300071, China;College of Life Science of Nankai University, Tianjin 300071, China;College of Life Science of Nankai University, Tianjin 300071, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | enantioselectivity (S)-Ketoprofen lipase cloning expression |
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