| 从水稻Ac/Ds插入突变体扩增Ds侧翼序列的最适TAIL-PCR引物 |
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| 引用本文： | 孙丙耀, PIAO Hai-Long, PARK Sung-Han, HAN Chang-Deok,.从水稻Ac/Ds插入突变体扩增Ds侧翼序列的最适TAIL-PCR引物[J].生物工程学报,2004,20(6). |
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| 作者姓名： | 孙丙耀 PIAO Hai-Long PARK Sung-Han HAN Chang-Deok |
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| 作者单位： | 1.苏州大学生命科学学院; 2.国立庆尚大学植物分子生物学与生物技术研究中心 苏州; 韩国晋州; |
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| 摘 要： | 温度非对称交互PCR(TAIL PCR)技术已广泛应用于从多种生物体系克隆侧翼于已知序列的DNA片段的分子操作中 ,并极大地促进了反向遗传学研究。但是 ,可能由于不同物种间基因组大小和序列存在显著差异 ,在采用该技术进行转座元件Ds水稻插入突变体鉴定过程中 ,常因TAIL PCR反应的稳定性差而影响突变体筛选效率。有鉴于此 ,根据Ds核苷酸序列设计了分别对应或互补于Ds插入元件两端长度不同的 12个特异引物组成 32个组合 ,在大量预试验基础上与 6个不同简并性 (32～256 )的随机简并引物分别组合进行TAIL PCR反应 ,较系统地研究了引物特性对以水稻基因组DNA为模板的TAIL PCR反应效率的影响。结果发现 ,第一反应采用长序列特异引物(36～ 4 0mer)可显著提高扩增特异性 ,随机简并引物的简并度对反应的影响显著。还选择出两个适于从水稻Ds插入突变体基因组高效扩增出Ds插入侧翼片段的最优特异引物组合和最适简并引物。应用本研究结果可显著地提高TAIL PCR技术筛选水稻插入突变体的效率
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| 关 键 词： | 随机简并（AD）引物 Ds-特异引物 Ds侧翼序列 水稻 温度非对称交互PCR |
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