人PPARαLBD在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定

过氧化物酶体增殖物活化受体α(peroxisome prolifterator-activated receptor α，PPARα)属于Ⅱ型核受体，通过其配体结合区（1igand binding domain,LBD）结合特定的激动剂对参与机体代谢的关键酶、受体等的表达起调节作用。本研究从人肝组织提取总RNA，RT-PCR扩增出PPARαLBD的cDNA，将其克隆入表达载体pMAL-p2X麦芽糖结合蛋白（Maltose Binding Protein,MBP）编码基因malE序列的下游，重组质粒转化E coli TB1，进行了高效的可溶性融合蛋白表达。产物经多糖亲和树脂（Amylose-resin）纯化后，获得了电泳纯的MBP-PPARαLBD。MBP-PPARαLBD用Xa因子酶切，经Amylose-resin亲和层析、DE-52阴离子交换层析纯化回收，获得了电泳纯的PPARαLBD。本研究为进一步比较MBP-PPARαLBD和PPARαLBD的功能，筛选PPARα配体奠定了基础。