| 利用CRISPR-Cas9技术构建敲除VDH的产香兰素拟无枝酸菌 |
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| 引用本文： | 郑义培,吴丹,郑璞. 利用CRISPR-Cas9技术构建敲除VDH的产香兰素拟无枝酸菌[J]. 微生物学报, 2021, 61(11): 3583-3593 |
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| 作者姓名： | 郑义培 吴丹 郑璞 |
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| 作者单位： | 江南大学工业生物技术教育部重点实验室, 江苏 无锡 214122;江南大学生物工程学院, 江苏 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家轻工技术与工程一流学科自主课题（LITE2018-04） |
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| 摘 要： | [目的] 建立适用于拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp.）的CRISPR-Cas9基因编辑系统，敲除其编码香兰素脱氢酶基因（VDH），减少发酵副产物香草酸。[方法] 以VDH为靶标基因，将pKCcas9dO质粒上的tipA、j23119启动子分别替换为pRLE6质粒Kmr启动子、链霉菌中常用的强启动子permE*，同时将sgRNA替换为能识别靶基因香兰素脱氢酶的特异性sgRNA，获得质粒pKCKmCas9VDH。然后将其与靶基因的上下游同源臂连接，获得敲除质粒pLYZYP01。将pLYZYP01质粒电转进Amycolatopsis sp.感受态细胞，筛选获得VDH的敲除突变体菌株。[结果] 利用上述方法，成功获得VDH敲除菌株Amycolatopsis sp.ΔVDH。[结论] 建立了适用于拟无枝酸菌CCTCC M 2011265的基因敲除系统，成功敲除VDH基因，在添加12 g/L底物阿魏酸的情况下，香兰素产量达到9.19 g/L，摩尔转化率由88.6%提高到97.7%。
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| 关 键 词： | 拟无枝酸菌 CRISPR-Cas9 基因敲除 香兰素 |
| 收稿时间： | 2021-02-04 |
| 修稿时间： | 2021-04-18 |
A vanillin producing Amycolatopsis sp. with the VDH gene knockout by CRISPR-Cas9 technology |
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| Yipei Zheng,Dan Wu,Pu Zheng. A vanillin producing Amycolatopsis sp. with the VDH gene knockout by CRISPR-Cas9 technology[J]. Acta microbiologica Sinica, 2021, 61(11): 3583-3593 |
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| Authors: | Yipei Zheng Dan Wu Pu Zheng |
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| Affiliation: | Key Laboratory of Industrial Biotechnology of Ministry of Education, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China;School of Biological Engineering, Jiangnan University, Wuxi 214122, Jiangsu Province, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Amycolatopsis CRISPR-Cas9 gene knockout vanillin |
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