| 大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因folA的克隆、表达纯化及分子间交联 |
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| 引用本文： | 刘凤华,席慧,高音,周霞,万平,何红伟.大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因folA的克隆、表达纯化及分子间交联[J].生物技术通讯,2004,15(4):346-349. |
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| 作者姓名： | 刘凤华 席慧 高音 周霞 万平 何红伟 |
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| 作者单位： | 首都师范大学生物系,蛋白质工程实验室,北京,100037 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(39800028)，北京市科技新星计划(96128) |
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| 摘 要： | 利用PCR技术从大肠杆菌DH5α中获取二氢叶酸还原酶(DHFR)基因folA。用限制性内切酶BamHI与PstI将该片段插入到克隆载体pUC18上，DNA测序鉴定目的基因。而后再将该基因亚克隆到表达载体pTrcHisC上，IPTG诱导表达重组蛋白。在非变性条件下，用TALON金属亲和层析树脂纯化含组氨酸标记的重组DHFR。纯化产物在热诱导条件下行SDSPAGE分析，除23000大小的单体外，还出现了交联的二聚体和多聚体；而当反应体系中含有还原剂β-巯基乙醇时，二聚体和多聚体都被减弱。推断蛋白质在热诱导条件下二级结构发生改变而产生交联，并且有二硫键的参与。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 二氢叶酸还原酶 基因 热诱导去折叠 二硫键 蛋白质交联 克隆 表达 |
| 文章编号： | 1009-0002(2004)04-0346-04 |
| 修稿时间： | 2003年12月8日 |
Cloning, expression, purification and protein cross-linking of Escherichia coli dihydrofolate reductase |
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| LIU Feng-hua,XI Hui,GAO Yin,ZHOU Xia,WAN Ping,HE Hong-wei Laboratory of Protein Engineering.Cloning, expression, purification and protein cross-linking of Escherichia coli dihydrofolate reductase[J].Letters in Biotechnology,2004,15(4):346-349. |
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| Authors: | LIU Feng-hua XI Hui GAO Yin ZHOU Xia WAN Ping HE Hong-wei Laboratory of Protein Engineering |
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| Institution: | LIU Feng-hua,XI Hui,GAO Yin,ZHOU Xia,WAN Ping,HE Hong-wei Laboratory of Protein Engineering,Department of Biology,Capital Normal University,Beijing100037,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | dihydrofolate reductase thermal unfolding disulfide bonds protein cross-linking |
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