质粒DNA的人工氯化艳线性梯度分离法

在遗传工程技术中，质粒被广泛用作重组 DNA的载体，有些肠道菌的致病基因位于大质 粒上。要克隆这些基因，先要纯化质粒，迄今 为止，已经有不少精制质粒的方法^57]。经典的均 一CsCI-EB密度离心法，需长时间的离心，使其 形成Cscl梯度，约40-60小时方能达到纯化 的目的。本法做了一些改进，采用0.6M和6M 两种不同的Cscl溶液，用日立DGF-U梯度 仪配成线性梯度，然后加粗提的质粒DNA和 EB的混合液，以日立RPS-65T水平转头，200C, 48,000rpm（约为160,000g）离心，小时，就能 把粗制pBR322样品中的染色体、开环（oc）和 共价闭合环状（ccc)质粒DNA分开。从而获 得纯的cc。质粒。带定居因子K88ac抗原的毒素 源性大肠杆菌野生型菌株，含有50 Md的大质 粒和一个小质粒，用酸酚法^7]、两相法^3]、蔗糖梯 度离心法、均一氯化艳-EB离心法、不连续（或 阶梯梯度）梯度Cscl离心法^2]琼脂糖凝胶电 泳法^6]等都难以获得纯的大质粒，用本文的方 法得到较好的效果，这不仅大大缩短了超速离 6时间，节省了氯化艳用量，同时对大小质粒 DNA的纯化均可适用。