| 小鼠胚胎干细胞中RNA干涉现象 |
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| 引用本文： | 孟国良,汤富酬,等.小鼠胚胎干细胞中RNA干涉现象[J].生物化学与生物物理学报,2003,35(3):238-246. |
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| 作者姓名： | 孟国良 汤富酬 |
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| 作者单位： | 北京大学生命科学学院 北京100871
(孟国良，汤富酬，张俊争，赵文宁，尚克刚，丁明孝)，北京大学生命科学学院 北京100871(薛友纺) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (No .30 170 45 6)~~ |
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| 摘 要： | 报道了不同品系小鼠胚胎干细胞 (ES细胞 )系MESPU13、B3和R1中存在的RNA干涉 (RNAi)现象。应用脂质体法 ,将转录绿色荧光蛋白 (GFP)基因双链RNA(dsRNA)的载体 (pdsGFP)转染GFP标记的ES细胞 ,dsRNA的瞬时表达可引起ES细胞中的RNAi效应 ,即质粒转录的GFP基因的dsRNA能够显著降低ES细胞内相应的外源GFP基因的表达 ;同时 ,用电穿孔转染法将线性化的pdsGFP puro导入ES细胞中 ,筛选后 ,在 3 0 %左右的抗性克隆中GFP表达量明显降低 ,少数细胞内的干涉效率达到RT PCR检测不到的程度。在此基础上 ,构建了可转录ES细胞特异标记基因OCT 4基因片断dsRNA的载体 ,经基因打靶和抗性筛选得到了稳定整合的ES细胞克隆 ,随机扩增了 5 1个克隆 ,并对其中的 48个阳性克隆进行了PCR半定量检测 ,结果显示 :在 11个ES细胞克隆中具有显著的RNAi效应 ,干涉效率达到RT PCR检测不到的程度。这一结果表明 ,应用RNAi在不同品系ES细胞中研究哺乳动物及人的基因功能是可行的
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| 关 键 词： | RNA干涉 ES细胞 双链RNA 反义RNA |
RNA Interference in Three ES Cell Lines from Different Mouse Strains |
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| MENG Guo-Liang,TANG Fu-Chou,ZHANG Jun-Zheng,ZHAO Wen-Ning,SHANG Ke-Gang,DING Ming-Xiao,XUE You-Fang.RNA Interference in Three ES Cell Lines from Different Mouse Strains[J].Acta Biochimica et Biophysica Sinica,2003,35(3):238-246. |
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| Authors: | MENG Guo-Liang TANG Fu-Chou ZHANG Jun-Zheng ZHAO Wen-Ning SHANG Ke-Gang DING Ming-Xiao XUE You-Fang |
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| Institution: | MENG Guo-Liang,TANG Fu-Chou,ZHANG Jun-Zheng,ZHAO Wen-Ning,SHANG Ke-Gang,DING Ming-Xiao,XUE You-Fang * |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RNA interference ES cells dsRNA antisense RNA |
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