血小板生成素双体分子的融合构建、原核表达及其分子结构特性预测

目的：为了研制更稳定、高效、低毒的血小板生成素(TPO)，拟设计构建TPO的双体分子(T-T)并在原核中表达，同时预测其融合蛋白的分子结构特性。方法：采用分子克隆方法分别构建TPO单体分子与双体分子的原核表达载体pFT32/TPO和pET32／T-T，并在大肠杆菌中进行表达，以Western blot鉴定表达产物；用生物信息学方法DS Gerie1.1和ProtScale软件，对该融合蛋白的结构特征如电点、柔性、抗原性及亲水性等进行模拟分析。结果：成功构建TPO双体分子pET32／T-T的原核表达载体，并经NcoⅠ和NotⅠ双酶切电泳及测序证实。通过转化origami^TM(DE3)感受态茵及IPTG诱导获得高效表达，其产量在40％以上；Western blot显示表达产物能与抗TPO单克隆抗体特异性结合。对T—T双体分子融合蛋白的结构特性预测表明，其融合蛋白中的两个TPO单体分子等电点、抗原性及亲水性均无显著改变，接头处具有高柔性。与TPO的原始序列相比，T-T的一级结构中有2个氨基酸发生改变，在接头(L)后插入一段34个氨基酸的新序列(N)。此序列具有一定的抗原性和亲水性，呈现B片层结构。结论：本研究所构建表达的TPO单体和T-T双体分子均可在大肠杆菌中获高效表达，T-T双体分子的结构预测符合设计要求，为进一步研究新型T-T双体分子融合蛋白的生物学特性提供了基础。

FUSION CONSTRUCTION, PROKARYOTICAL EXPRESSION AND STRUCTURE CHARACTERISTICS PREDICTION OF BIMOLECULAR THROMBOPOIETIN