木糖葡萄球菌实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用

目的 本研究拟建立一种灵敏快速的实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)方法，用于检测大、小鼠木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus,S.xylosus)。方法 本研究选择特异性gehM基因片段作为靶标合成了一套引物，建立了木糖葡萄球菌检测的qPCR方法。对木糖葡萄球菌标准菌株和其他非目标菌进行特异性分析。将木糖葡萄球菌的DNA进行10倍稀释测定其灵敏度。用送检的样本进行了临床应用并测序验证，同时与培养法进行比较。结果 仅木糖葡萄球菌出现特异性扩增曲线，而其他非目标菌未出现，表明设计的引物对木糖葡萄球菌具有特异性，灵敏度为100 fg/μL,组内和组间重复性均小于3%。共检测60份临床样品，有5份样品扩增曲线为典型的S曲线，将该qPCR产物克隆测序并进行同源性比对，该序列与木糖葡萄球菌的同源性为99.63%,表明该样本木糖葡萄球菌核酸阳性，所检测样本阳性率为8.3%,而培养法的阳性率为6.7%,qPCR方法阳性检出率比培养法略高。结论 建立的木糖葡萄球菌qPCR方法，具有快速、灵敏度高、特异性强和重复性好的优点，可用于实...