| 从HFRS患者的PBMC建立BLCL及其意义 |
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| 引用本文： | 潘蕾,白雪帆,黄长形,李光玉,陈伟红. 从HFRS患者的PBMC建立BLCL及其意义[J]. 中国病毒学, 2004, 19(5): 439-443 |
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| 作者姓名： | 潘蕾 白雪帆 黄长形 李光玉 陈伟红 |
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| 作者单位： | 第四军医大学唐都医院传染科,陕西,西安,710038 |
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| 摘 要： | 体外研究汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)S基因及其5'端、3'端在BLCL(EBV-transformed Blymphoblastoidcellline,BLCL)内稳定表达的意义,为核蛋白T细胞表位的研究奠定基础.本研究从肾综合征出血热(HFRS)患者的外周血单个核细胞(PBMC)建立与HTNV特异性CTL同源的患者自身的EB病毒转化的B淋巴母细胞系,将含有不同HTNV S基因片段的重组真核表达载体转染入BLCL,获得长期稳定表达,作为靶细胞系,为下一步进行CTL杀伤试验提供靶细胞系.设计4条引物,用PCR方法从PBV220-S22原核质粒中扩增出S基因全读码框(37-1326bp)及S基因5'端(37-501bp),S基因3'端(502-1326bp),用TA克隆将其克隆入pcDNA3.1/V5-His-TOPO载体中,成功构建pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N、pcDNA3.1-S-C真核表达载体,并通过脂质体转染至BLCL细胞中,进行了稳定表达.间接免疫荧光成功检测到pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N、pcDNA3.1-S-C在BLCL细胞中的表达.pcDNA3.1-S及pcDNA3.1-S-N、pcDNA3.1-S-C真核表达载体有较高的转染效率,目的基因能在宿主细胞中长期稳定表达,有利于研究HTNV-S基因在T细胞表位研究中的意义.建立的特异性CTL克隆对表达完整NP、NP羧基和氨基端肽段的靶细胞均有比较明显的杀伤效应,平均杀伤率分别为50.2%、39.0%和25.4%.HTNV-NP优势T细胞表位可能主要位于病毒核蛋白的羧基端.
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| 关 键 词： | 汉滩病毒 S基因 核蛋白 BLCL |
| 文章编号： | 1003-5125(2004)05-0439-05 |
| 修稿时间： | 2004-03-01 |
Significance of BLCL Constructed from PBMC in HFRS Patients |
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| PAN Lei,BAI Xue-fan,HUANG Chang-xing,LI Guang-yu,CHEN Wei-hong. Significance of BLCL Constructed from PBMC in HFRS Patients[J]. Virologica Sinica, 2004, 19(5): 439-443 |
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| Authors: | PAN Lei BAI Xue-fan HUANG Chang-xing LI Guang-yu CHEN Wei-hong |
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| Affiliation: | 1.Tangdu Hospital, The Fourth Military Medical University, Xi’an 710038，China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hantaan virus S gene segment Nucleocapsid protein BLCL |
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