青花菜雄性不育相关基因BoDHAR的克隆与表达分析

以一个与甘蓝显性核不育相关的差异表达片段的序列为信息探针，通过在NCBI与TAIR网站数据库中进行同源EST序列搜索，经人工拼接、RT-PCR、PCR 克隆与序列分析，获得了青花菜脱氢抗坏血酸还原酶DHAR dehydroascorbate reductase 基因的 cDNA 与 DNA 全长序列，命名为BoDHAR。并利用双链接头介导 PCR 的染色体步行技术（genome walking）克隆了其上游 644bp 的5′端序列。所获的BoDHAR基因全长 1486bp，存在两个内含子，DNA 编码区序列633bp，编码210个氨基酸；序列分析表明：BoDHAR与同源基因AT1G195701cDNA 序列有 82.3% 的一致性，推导的氨基酸序列有 79.6% 的一致性；编码的水溶性蛋白存在多个磷酸化位点；5′端上游区存在明显的转录调控序列。半定量RT-PCR结果表明：BoDHAR 在可育系花蕾中的表达量明显高于不育系花蕾，在花药中的表达明显高于其它部位。