| 牛结核γ干扰素ELISPOT检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 徐正中,单法,单锋丽,孟闯,解晓莉,刘佳莹,闵晶晶,陈祥,焦新安. 牛结核γ干扰素ELISPOT检测方法的建立[J]. 生物工程学报, 2015, 31(2): 183-194 |
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| 作者姓名： | 徐正中 单法 单锋丽 孟闯 解晓莉 刘佳莹 闵晶晶 陈祥 焦新安 |
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| 作者单位： | 扬州大学 江苏省人兽共患病学重点实验室 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病学重点实验室 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病学重点实验室 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病学重点实验室 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病学重点实验室 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病学重点实验室 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病学重点实验室 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病学重点实验室 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009,扬州大学 江苏省人兽共患病学重点实验室 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划 (973计划) (No. 2012CB518805)，国家星火计划 (No. 2014GA690017)，扬州市自然科学基金 (No. YZ2014027)，江苏省高等学校大学生创新创业训练计划项目 (No. 201411117069X)，江苏高校优势学科建设工程项目资助。 |
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| 摘 要： | 本研究旨在建立一种牛结核γ干扰素ELISPOT检测方法,并评价该方法用于牛结核病检测的价值。通过筛选与天然牛γ干扰素特异性结合的单克隆抗体分别作为包被抗体和检测抗体,并探索不同的实验条件确定最佳包被抗体浓度、最佳细胞数量和最佳检测抗体浓度等,建立牛γ干扰素ELISPOT检测方法。采集30头奶牛尾静脉血并分离外周血单个核细胞,以结核菌素作为刺激原,使用建立的ELISPOT检测方法进行牛结核病检测,并与BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测结果进行比较。筛选到两株与天然牛γ干扰素特异性结合的单抗2G5和5E11,确定ELISPOT检测方法的最佳实验条件为:包被抗体2G5浓度2.5μg/m L,每孔细胞数量2.5×105个,检测抗体Bio-5E11浓度1μg/mL。使用建立的ELISPOT检测方法与BOVIGAMTM ELISA试剂盒对30头奶牛进行同步检测,结果显示,以BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测结果作为参考标准,14头BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测阳性牛中,ELISPOT方法检出的阳性牛为11头,敏感性为78.6%(11/14);16头BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测阴性牛中,ELISPOT方法检出的阴性牛为12头,特异性为75%(12/16)。应用结核菌素作为刺激原的牛结核γ干扰素ELISPOT检测方法可用于牛结核病辅助检测,具有潜在的临床应用价值。
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| 关 键 词： | 牛γ干扰素 ELISPOT 结核菌素 牛结核病 |
| 收稿时间： | 2014-05-19 |
Development of an interferon-gamma ELISPOT for bovine tuberculosis |
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| Affiliation: | Jiangsu Key Lab of Zoonosis, Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,Jiangsu Key Lab of Zoonosis, Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,Jiangsu Key Lab of Zoonosis, Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,Jiangsu Key Lab of Zoonosis, Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,Jiangsu Key Lab of Zoonosis, Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,Jiangsu Key Lab of Zoonosis, Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,Jiangsu Key Lab of Zoonosis, Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China,Jiangsu Key Lab of Zoonosis, Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China and Jiangsu Key Lab of Zoonosis, Jiangsu Co-Innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou University, Yangzhou 225009, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | bovine interferon-gamma enzyme-linked immunospot assay tuberculin bovine tuberculosis |
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