| 基于双质粒拯救系统的新城疫病毒LaSota株的拯救 |
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| 引用本文： | 宗宪春,段姝宇,朱广美,徐哲,肖萌萌,王丹,贺怀悦,王建忠.基于双质粒拯救系统的新城疫病毒LaSota株的拯救[J].微生物学报,2024,64(5):1567-1579. |
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| 作者姓名： | 宗宪春 段姝宇 朱广美 徐哲 肖萌萌 王丹 贺怀悦 王建忠 |
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| 作者单位： | 吉林农业大学动物医学院 动物重大疫病微生态疫苗(药物)教育部工程研究中心, 吉林 长春 130118 |
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| 基金项目： | 吉林省自然科学基金(20220101314JC) |
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| 摘 要： | 传统新城疫病毒(newcastle disease virus, NDV)的拯救系统包括一个cDNA克隆质粒和分别表达NDV的核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、聚合酶蛋白(L)的3个辅助质粒，且必须满足4个质粒同时转染进入同一个宿主细胞才能完成病毒的组装，效率相对低下。【目的】提高NDV的拯救效率，并建立双质粒高效拯救系统。【方法】将NP、P、L基因表达盒串联克隆至真核表达载体pCI中，构建为可同时表达NP、P、L蛋白的单辅助质粒PCI-NPL；同时，采用分段克隆再拼接的方式，将NDV LaSota株基因组cDNA克隆于真核表达质粒pCI的CMV启动子下游，并分别在P和M基因中插入报告基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)、5''端引入锤头状核酶序列、3''端引入丁型肝炎病毒核酶序列，构成全基因组转录质粒pCI-LaSota-EGFP；以pCI-LaSota-EGFP和pCI-NPL组成病毒拯救系统共转染至BHK-21细胞，拯救获得重组子代病毒rLaSota-EGFP，并进行系列生物学特性鉴定。【结果】经RT-PCR、荧光显微镜观察、Western blotting、生长特性测定等系列鉴定，证明rLaSota-EGFP构建正确，成功拯救获得了重组病毒rLaSota-EGFP，且与野生型(wild-type, WT) LaSota具有相似的生物学特性。【结论】基于CMV启动子的NDV双质粒新型拯救系统构建成功，为重组NDV及其他副黏病毒的高效拯救奠定了基础。
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| 关 键 词： | 反向遗传学技术 新城疫病毒 病毒拯救 双质粒拯救系统 |
| 收稿时间： | 2023/11/30 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2024/1/31 0:00:00 |
A two-plasmid rescue system for rescue of recombinant LaSota strain of newcastle disease virus |
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| Zong Xianchun,Duan Shuyu,Zhu Guangmei,Xu Zhe,Xiao Mengmeng,Wang Dan,He Huaiyue,Wang Jianzhong.A two-plasmid rescue system for rescue of recombinant LaSota strain of newcastle disease virus[J].Acta Microbiologica Sinica,2024,64(5):1567-1579. |
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| Authors: | Zong Xianchun Duan Shuyu Zhu Guangmei Xu Zhe Xiao Mengmeng Wang Dan He Huaiyue Wang Jianzhong |
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| Institution: | Engineering Research Center of Microecological Vaccines (Drugs) for Major Animal Diseases, Ministry of Education, College of Veterinary Medicine, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, Jilin, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | reverse genetics newcastle disease virus virus rescue two-plasmid rescue system |
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