| 组织基质金属蛋白酶抑制剂-2的表达纯化及活性鉴定 |
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| 引用本文： | 薛爱英,冯国兴,朱长春,樊赛军. 组织基质金属蛋白酶抑制剂-2的表达纯化及活性鉴定[J]. 生物工程学报, 2020, 36(12): 2868-2876 |
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| 作者姓名： | 薛爱英 冯国兴 朱长春 樊赛军 |
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| 作者单位： | 中国医学科学院北京协和医学院放射医学研究所 天津市放射医学与分子核医学重点实验室，天津 300192 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (Nos. 81703042, 81730086) 资助。 |
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| 摘 要： | 组织基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)抑制肿瘤迁移及侵袭。文中以人TIMP-2为研究对象,探索人TIMP-2蛋白的原核表达特征,并进行纯化及活性鉴定。以人肺癌A549细胞的总RNA反转录得到的cDNA为模板,克隆人TIMP-2基因,构建pET28a重组表达载体;经酶切检测和测序分析的重组表达载体pET28a-TIMP-2转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,并对表达条件进行优化。经镍亲和柱纯化后,用Westernblotting法鉴定融合蛋白His-TIMP-2,并用明胶酶谱法检测融合蛋白的活性。研究发现融合蛋白His-TIMP-2在E.coliBL21(DE3)中以包涵体的形式存在;在一定范围内,IPTG浓度对His-TIMP-2的表达量没有显著影响;而在该表达系统中,诱导温度和时间是关键参数,His-TIMP-2的表达量随诱导温度升高而增加;纯化并复性后的融合蛋白His-TIMP-2能有效抑制人肺癌A549细胞表达的基质金属蛋白酶的活性。具有活性的融合蛋白的获得为后续深入研究人TIMP-2的功...
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| 关 键 词： | 基质金属蛋白酶抑制剂-2 重组表达载体 包涵体 纯化 基质金属蛋白酶 |
| 收稿时间： | 2020-08-03 |
Prokaryotic expression, purification and characterization of tissue inhibitor of metalloproteinase-2 |
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| Aiying Xue,Guoxing Feng,Changchun Zhu,Saijun Fan. Prokaryotic expression, purification and characterization of tissue inhibitor of metalloproteinase-2[J]. Chinese journal of biotechnology, 2020, 36(12): 2868-2876 |
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| Authors: | Aiying Xue Guoxing Feng Changchun Zhu Saijun Fan |
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| Affiliation: | Tianjin Key Laboratory of Radiation Medicine and Molecular Nuclear Medicine, Institute of Radiation Medicine, Chinese Academy of Medical Sciences, Peking Union Medical College, Tianjin 300192, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | tissue inhibitor of metalloproteinase-2 recombinant expression vector inclusion body purification matrix metalloproteinase |
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