| 水稻RNA结合蛋白C3H12与RNA结合位点的鉴定 |
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| 引用本文： | 智东明,方涵,陶虎,邓汉卿,王媛媛. 水稻RNA结合蛋白C3H12与RNA结合位点的鉴定[J]. 中国生物化学与分子生物学报, 1985, 35(11): 1275-1283. DOI: 10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.11.13 |
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| 作者姓名： | 智东明 方涵 陶虎 邓汉卿 王媛媛 |
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| 作者单位： | (西北农林科技大学1）生命科学学院；2）化学与药学院，陕西 杨凌712100) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（No.21403168，No.31301647）资助 |
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| 摘 要： | CCH型锌指蛋白质C3H12是进化上保守的RNA结合蛋白质，它含有5个串联的CCCH锌指结构域ZnF1-5，形成2个紧密的锌指簇ZnF1-3和ZnF4-5。早期的研究发现，C3H12可能通过与mRNA结合的方式在转录后水平调控基因的表达。然而，与C3H12结合的mRNA类型和他们的结合模式，并未通过实验得到证明。本文表达纯化了一系列C3H12截短及全长蛋白质，并合成了一些潜在RNA底物ARE9、ARE19及对照Random21。通过等温滴定量热法 (isothermal titration calorimetry, ITC) 确定了C3H12与富含腺嘌呤尿嘧啶单元 (AU-rich element, ARE) mRNA底物的结合，并揭示了互作核心区域和热力学性质。通过荧光光谱分析和微型热泳动 (microscale thermophoresis, MST)技术对ITC的结果进一步佐证。结果表明：(1) C3H12与ARE底物的相互作用是焓驱动的能量有利的 (ΔG<0) 特异性结合，结合比为1:1。(2) C3H12与ARE19的亲和力较ARE9更高（约2倍）。(3) C3H12中ZnF1-3在与ARE类底物的结合活性中发挥主导作用。(4) C3H12结构中的141个氨基酸残基的接头不直接参与和ARE底物的相互作用。本研究揭示的CCCH型锌指蛋白质C3H12与ARE底物结合模式，将为进一步在分子结构水平阐明C3H12与ARE底物结合的机制奠定基础。
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| 关 键 词： | CCCH型锌指蛋白质 RNA结合蛋白质 等温滴定量热法 荧光光谱分析 微型热泳动 |
| 收稿时间： | 2019-04-29 |
Identification of Binding Center Site of RNA-binding Protein C3H12 in Rice |
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| ZHI Dong-Ming,FANG Han,TAO Hu,DENG Han-Qing,WANG Yuan-Yuan. Identification of Binding Center Site of RNA-binding Protein C3H12 in Rice[J]. Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology, 1985, 35(11): 1275-1283. DOI: 10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.11.13 |
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| Authors: | ZHI Dong-Ming FANG Han TAO Hu DENG Han-Qing WANG Yuan-Yuan |
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| Affiliation: | (1)College of Life Sciences;2)College of Chemistry and Pharmacy, Northwest A&F University，Yangling 712100， Shaanxi， China) |
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