| 基于分子伴侣策略提高NADPH依赖型醇脱氢酶的异源可溶性表达 * |
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| 引用本文： | 邓通,周海胜,吴坚平,杨立荣. 基于分子伴侣策略提高NADPH依赖型醇脱氢酶的异源可溶性表达 *[J]. 中国生物工程杂志, 1981, 40(8): 24-32. DOI: 10.13523/j.cb.2005006 |
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| 作者姓名： | 邓通 周海胜 吴坚平 杨立荣 |
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| 作者单位： | 浙江大学化学工程与生物工程学院生物工程研究所 杭州 310027 |
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| 基金项目： | * 国家自然科学基金(21476199) |
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| 摘 要： | 目的:生物催化的氧化还原反应广泛应用于手性化合物的制备,其中很多反应涉及辅酶NADPH的原位再生。以异丙醇为辅助底物,利用醇脱氢酶再生NADPH,具有比酶活高、副产物丙酮易于分离等优势,受到越来越多的关注。选择极具应用潜力的来源于Clostridium beijerinckii的醇脱氢酶CbADH作为研究对象,针对其在大肠杆菌中的可溶性表达差、酶活低的瓶颈问题开展研究。方法: 首先通过引入诱导型质粒pGro7表达分子伴侣GroES-GroEL,将pET-28a(+)质粒表达CbADH的可溶性提高了3.57倍,酶活达到出发菌株的4.83倍。其次,考察了另外三种不同的分子伴侣表达策略:pET-28a(+)单质粒共表达、基因组强化表达GroES-GroEL和组成型改造pGro7/GroES-GroEL和pET-28a(+)/CbADH双质粒共表达。结果: 组成型改造pGro7和pET-28a(+)双质粒共表达策略的效果最优,其CbADH的可溶性表达提高了8.07倍,酶活达到了21.79U/mg DCW,是出发菌株的9.43倍。结论: 为CbADH的工业应用奠定了良好的基础,也为外源蛋白的可溶性表达提供了参考。
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| 关 键 词： | 醇脱氢酶 异源可溶性表达 分子伴侣 NADPH |
| 收稿时间： | 2020-05-06 |
Enhance Soluble Heteroexpression of a NADPH-Dependent Alcohol Dehydrogenase Based on the Chaperone Strategy |
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| DENG Tong,ZHOU Hai-sheng,WU Jian-ping,YANG Li-rong. Enhance Soluble Heteroexpression of a NADPH-Dependent Alcohol Dehydrogenase Based on the Chaperone Strategy[J]. China Biotechnology, 1981, 40(8): 24-32. DOI: 10.13523/j.cb.2005006 |
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| Authors: | DENG Tong ZHOU Hai-sheng WU Jian-ping YANG Li-rong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Alcohol dehydrogenase Soluble heteroexpression Chaperone NADPH |
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