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| 鸡胚成纤维细胞cDNA表达文库的构建 | |
| 引用本文： | 刘伟,高玉龙,高宏雷,王笑梅,许修宏.鸡胚成纤维细胞cDNA表达文库的构建[J].微生物学报,2007,47(3):413-417. |
| 作者姓名： | 刘伟 高玉龙 高宏雷 王笑梅 许修宏 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,哈尔滨,150001;东北农业大学资源与环境学院微生物系,哈尔滨,150030 2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,哈尔滨,150001 3. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,哈尔滨,150001;黑龙江省农业科学院,博士后科研工作站,哈尔滨,150001 4. 东北农业大学资源与环境学院微生物系,哈尔滨,150030 |
| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划) |
| 摘 要： | 鸡胚成纤维细胞(CEF)是研究鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的主要细胞材料,而构建CEF的cDNA表达文库是筛选IBDV在CEF中的细胞受体,研究细胞嗜性的基础平台。采用Gateway技术构建CEF的表达文库,避免使用限制性内切酶切割cDNA,能够解决常规方法构建cDNA文库的技术缺陷。该技术将CEF的mRNA分离纯化后,以5′端生物素标记的Oligo(dT)primer为引物反转录后连接Adapter,层析柱纯化,通过BP重组反应构建cDNA入门文库,其平均滴度为1.1×106cfu/mL,文库总容量为1.2×107cfu,平均插入片段为2243bp,重组率为100%。通过LR重组反应将入门文库转换为表达文库,经测定平均滴度为5×105cfu/mL,文库总容量为5.5×106cfu,平均插入片段为2411bp,重组率为100%。结果表明,所构建的文库具有较高的重组率和较大的库容量,可作为较高质量的文库来研究IBDV的相关基因,为研究病毒受体和病毒入侵途径,进一步了解IBDV的致病机理奠定了基础。 |
| 关 键 词： | 鸡胚成纤维细胞(CEF) Gateway技术 cDNA表达文库 传染性法氏囊病病毒(IBDV) |
| 文章编号： | 0001-6209（2007）03-0413-05 |
| 收稿时间： | 2006/9/13 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2006-09-132007-01-25 |
Construction of chicken embryo fibroblasts cDNA expression library |
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| LIU Wei,GAO Yu-long,GAO Hong-lei,WANG Xiao-mei and XU Xiu-hong.Construction of chicken embryo fibroblasts cDNA expression library[J].Acta Microbiologica Sinica,2007,47(3):413-417. | |
| Authors: | LIU Wei GAO Yu-long GAO Hong-lei WANG Xiao-mei and XU Xiu-hong |
| Institution: | 1.Division of Avian Infectious Diseases; National Kay Laboratory of Veterinary Biotechnology; Harbin Veterinary Research Institute; Chinese Academy of Agricultural Sciences; Harbin 150001; China;2.North-east Agriculture University; Harbin;Division of Avian Infectious Diseases; National Kay Laboratory of Veterinary Biotechnology; Harbin Veterinary Research Institute; Chinese Academy of Agricultural Sciences; Harbin 150001; China;Division of Avian Infectious Diseases; National Kay Laboratory of Veterinary Biotechnology; Harbin Veterinary Research Institute; Chinese Academy of Agricultural Sciences; Harbin 150001; China;1.Division of Avian Infectious Diseases; National Kay Laboratory of Veterinary Biotechnology; Harbin Veterinary Research Institute; Chinese Academy of Agricultural Sciences; Harbin 150001; China;3.Heilongjiang Academy of Agricultural Scie;North-east Agriculture University; Harbin 150030; China |
| Abstract: | |
| Keywords: | Chicken embryo fibroblast(CEF) Gateway technology cDNA expression library Infectious bursal disease virus(IBDV) |
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