里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ在毕赤酵母中的高效表达 |
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作者姓名: | 张煜 刘刚 余少文 汤新 邢苗 |
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作者单位: | 深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室,深圳,518060;深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室,深圳,518060;深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室,深圳,518060;深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室,深圳,518060;深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室,深圳,518060 |
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基金项目: | 深圳市科技计划重点项目资助 |
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摘 要: | 本工作采用巴氏毕赤酵母Pichiapastoris表达系统进行了里氏木霉Trichodermareesei纤维二糖水解酶Ⅱ(CellobiohydrolaseII)的表达。用RT-PCR的方法从经稻草粉诱导的里氏木霉培养物中分离出纤维二糖水解酶Ⅱ的基因,将其插入到巴氏毕赤酵母的表达载体pPICZαA中,并使之处于α-因子信号肽序列的下游,得到重组质粒pPICZαA-cbh2。通过电穿孔的方法用线性化的pPICZαA-cbh2转化巴氏毕赤酵母GS115菌株,经过大量筛选后得到可以高效表达纤维二糖水解酶的毕赤酵母菌株P.pastorisCBHⅡ1。在甲醇诱导的条件下培养P.pastorisCBHⅡ1,培养液中的CMC活性可达到3.82U/mL,SDS-PAGE分析结果表明纤维二糖水解酶在P.pastorisCBHⅡ1中的表达量远远高于里氏木霉。对表达产物进行了LC-MS分析,结果表明所表达的蛋白为里氏木霉的纤维二糖水解酶。
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关 键 词: | 纤维素酶 整合表达 液质联用 羧甲基纤维素 |
文章编号: | 1672-6472(2005)03-0367-0375 |
收稿时间: | 2004-12-26 |
修稿时间: | 2005-03-07 |
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