| 里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ在毕赤酵母中的高效表达 |
| |
| 作者姓名： | 张煜 刘刚 余少文 汤新 邢苗 |
| |
| 作者单位： | 深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室,深圳,518060;深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室,深圳,518060;深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室,深圳,518060;深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室,深圳,518060;深圳大学生命科学学院,深圳市微生物基因工程重点实验室,深圳,518060 |
| |
| 基金项目： | 深圳市科技计划重点项目资助 |
| |
| 摘 要： | 本工作采用巴氏毕赤酵母Pichiapastoris表达系统进行了里氏木霉Trichodermareesei纤维二糖水解酶Ⅱ(CellobiohydrolaseII)的表达。用RT-PCR的方法从经稻草粉诱导的里氏木霉培养物中分离出纤维二糖水解酶Ⅱ的基因,将其插入到巴氏毕赤酵母的表达载体pPICZαA中,并使之处于α-因子信号肽序列的下游,得到重组质粒pPICZαA-cbh2。通过电穿孔的方法用线性化的pPICZαA-cbh2转化巴氏毕赤酵母GS115菌株,经过大量筛选后得到可以高效表达纤维二糖水解酶的毕赤酵母菌株P.pastorisCBHⅡ1。在甲醇诱导的条件下培养P.pastorisCBHⅡ1,培养液中的CMC活性可达到3.82U/mL,SDS-PAGE分析结果表明纤维二糖水解酶在P.pastorisCBHⅡ1中的表达量远远高于里氏木霉。对表达产物进行了LC-MS分析,结果表明所表达的蛋白为里氏木霉的纤维二糖水解酶。
|
| 关 键 词： | 纤维素酶 整合表达 液质联用 羧甲基纤维素 |
| 文章编号： | 1672-6472（2005）03-0367-0375 |
| 收稿时间： | 2004-12-26 |
| 修稿时间： | 2005-03-07 |
| 本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《菌物学报》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《菌物学报》下载全文 |
|
