粉尘螨线粒体样苹果酸脱氢酶基因cDNA克隆和分子特征分析

摘要 目的：获取粉尘螨线粒体样苹果酸脱氢酶蛋白（mitochondrial-like malate dehydrogenase,mMDH）的编码基因并了解其分子特征。方法：以粉尘螨Total RNA为模板,RT-PCR扩增获得mMDH编码基因后、构建原核表达质粒,转化E.coil BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定目的蛋白表达情况。采用NCBI、EXPASY在线生物信息学软件分析该基因编码蛋白质的生物学特征。结果：获得粉尘螨线粒体样苹果酸脱氢酶蛋白的编码基因,全长1032bp。构建的原核表达质粒pET28a(+)-mMDH,经转化和诱导表达后,SDS-PAGE和Western Blot可见目的蛋白条带。该基因编码的蛋白质由343个氨基酸组成,相对分子质量（Mr）36014.54Da,亚细胞定位主要在细胞质和细胞核,含有34个磷酸化位点（19个丝氨酸,12个苏氨酸和3个酪氨酸）。糖基化预测结果显示其含有2个N-糖基化位点（123位存在糖基化位点NASI和151位存在糖基化位点NSTV）和1个0-糖基化位点。二级结构主要为?琢-螺旋和无规则卷曲。三维建模可观察到该蛋白为二聚体结构,CD-Search保守区域分析后显示其属于NADB-Rossmann家族,具有MDH-glyoxysomal-mitochondrial结构域。PyMol可视化后可在三维结构中观察到保守区域位点。将该基因推导出的氨基酸序列进行Blast获得同源基因,粉尘螨与屋尘螨、梅氏嗜霉螨进化关系较近,独成一簇。结论：获得粉尘螨线粒体样苹果酸脱氢酶蛋白的编码基因全长及其原核表达质粒,并对其生物学特征进行分析,为进一步探讨该基因的生理功能、开发尘螨控制措施奠定基础。

cDNA Cloning and Molecular Characterization of Mitochondrial-like Malate Dehydrogenase Protein Gene of Dermatophagoides Farinae