| 黏细菌漆酶序列筛选及其重组酶酶学性质 |
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| 引用本文： | 赵秀艳,常飞,方泽民,张寅良,肖亚中. 黏细菌漆酶序列筛选及其重组酶酶学性质[J]. 生物工程学报, 2017, 33(4): 609-619 |
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| 作者姓名： | 赵秀艳 常飞 方泽民 张寅良 肖亚中 |
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| 作者单位： | 1 安徽大学 生命科学学院，安徽 合肥 230601; 2安徽省微生物与生物催化工程技术研究中心，安徽 合肥 230601,1 安徽大学 生命科学学院，安徽 合肥 230601; 2安徽省微生物与生物催化工程技术研究中心，安徽 合肥 230601,1 安徽大学 生命科学学院，安徽 合肥 230601; 2安徽省微生物与生物催化工程技术研究中心，安徽 合肥 230601,1 安徽大学 生命科学学院，安徽 合肥 230601; 2安徽省微生物与生物催化工程技术研究中心，安徽 合肥 230601,1 安徽大学 生命科学学院，安徽 合肥 230601; 2安徽省微生物与生物催化工程技术研究中心，安徽 合肥 230601 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No. 31600078) 资助。 |
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| 摘 要： | 漆酶是一种应用广泛的绿色环保的多酚氧化酶。漆酶过去被认为广泛存在于植物、昆虫和真菌中,而近年来,越来越多的细菌中也发现了漆酶的存在。黏细菌是一类重要的资源菌,但与一般细菌相比,较难分离和纯化。文中利用生物信息学的方法,综合应用Blast和隐马尔可夫模型方法对黏细菌蛋白质组数据库进行搜索,并根据多铜氧化酶的保守铜离子结合位点进行进一步筛选,获得30个候选黏细菌漆酶序列。挑选其中9个,在大肠杆菌中进行重组表达。利用2,6-甲氧基苯酚(DMP)等常用漆酶底物检测重组酶的催化氧化活性,其中7个重组蛋白具有漆酶催化活性。选择1个对2,6-甲氧基苯酚(DMP)具有较高氧化活性的重组酶(命名为rSC-2),通过Ni-NTA亲和层析柱纯化rSC-2,测试其酶学性质。纯化的rSC-2蛋白分子量约57 kDa,在最适反应条件下,rSC-2催化DMP反应的比酶活为0.27 U/mg。催化DMP反应的最适温度为60℃,最适pH为7.0。rSC-2在pH 7.0-8.0有较高酶活,在60℃孵育1 h保留50%以上剩余酶活。低浓度的Ca~(2+)对酶活有一定的促进作用,而较高浓度的Fe~(3+)、Co~(2+)、Ba~(2+)对酶活的抑制作用较明显。这是首次对黏细菌漆酶序列进行系统性的生物信息学分析,并实现纤维堆囊菌Sorangium cellulosum序列来源的漆酶活性蛋白在大肠杆菌细胞中重组表达。
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| 关 键 词： | 生物信息学，黏细菌漆酶，重组表达，分离纯化，酶学性质 |
| 收稿时间： | 2016-09-23 |
Bioinformatic analysis and characterization of myxobacteria laccase-like multicopper oxidases |
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| Xiuyan Zhao,Fei Chang,Zemin Fang,Yinliang Zhang and Yazhong Xiao. Bioinformatic analysis and characterization of myxobacteria laccase-like multicopper oxidases[J]. Chinese journal of biotechnology, 2017, 33(4): 609-619 |
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| Authors: | Xiuyan Zhao Fei Chang Zemin Fang Yinliang Zhang Yazhong Xiao |
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| Affiliation: | 1 School of Life Sciences, Anhui University, Hefei 230601, Anhui, China; 2 Anhui Provincial Engineering Technology Research Center of Microorganisms and Biocatalysis, Hefei 230601, Anhui, China,1 School of Life Sciences, Anhui University, Hefei 230601, Anhui, China; 2 Anhui Provincial Engineering Technology Research Center of Microorganisms and Biocatalysis, Hefei 230601, Anhui, China,1 School of Life Sciences, Anhui University, Hefei 230601, Anhui, China; 2 Anhui Provincial Engineering Technology Research Center of Microorganisms and Biocatalysis, Hefei 230601, Anhui, China,1 School of Life Sciences, Anhui University, Hefei 230601, Anhui, China; 2 Anhui Provincial Engineering Technology Research Center of Microorganisms and Biocatalysis, Hefei 230601, Anhui, China and 1 School of Life Sciences, Anhui University, Hefei 230601, Anhui, China; 2 Anhui Provincial Engineering Technology Research Center of Microorganisms and Biocatalysis, Hefei 230601, Anhui, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bioinformatics myxobacteria laccase recombinant expression separation and purification enzymology characterization |
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