| 腺病毒载体介导PDX-1在骨髓间充质干细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 李艳华,张锐,王韫芳,赵连旭,陈琳,岳文,裴雪涛. 腺病毒载体介导PDX-1在骨髓间充质干细胞中的表达[J]. 生物化学与生物物理进展, 2004, 31(6) |
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| 作者姓名： | 李艳华 张锐 王韫芳 赵连旭 陈琳 岳文 裴雪涛 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划)，国家重点基础研究发展计划(973计划) |
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| 摘 要： | 为研究PDX-1基因在骨髓间充质干细胞中的表达情况及生物学功能的发挥,构建了含PDX-1基因的重组腺病毒载体.酶切PDX-1基因并连入穿梭质粒pAdTrack-CMV.用电穿孔法使穿梭质粒pAdTrack-CMV-PDX-1与病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组.利用脂质体介导重组腺病毒载体转染293细胞,包装出完整的腺病毒.分离、培养、扩增骨髓间充质干细胞.用重组腺病毒感染间充质干细胞.用荧光显微镜、RT-PCR、免疫荧光染色等方法检测PDX-1、胰岛素基因及蛋白质的表达,用放射免疫分析法检测转基因细胞分泌胰岛素情况.结果表明:通过测序、PCR、酶切等鉴定PDX-1基因已正确插入穿梭质粒中,并与病毒骨架质粒重组.重组腺病毒滴度为6.3×107PFU/ml.通过荧光显微镜观察证实重组腺病毒可高效感染骨髓间充质干细胞,经RT-PCR、免疫荧光染色证实转染pAd-PDX-1后培养7天的细胞中有PDX-1及胰岛素基因的表达.这些转基因的细胞向胞外分泌的胰岛素量为(15.21±3.50)mIU/L.
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| 关 键 词： | PDX-1 腺病毒载体 间充质干细胞 |
The Expression of PDX-1 Gene in Mesenchymal Stem Cells Transduced by Adenovirus Vector |
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