紫玉兰‘红元宝'花芽分化阶段基因定量分析的内参基因筛选 |
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作者姓名: | 章颖佳 程少禹 王卓为 戴梦怡 董 彬 张 超 张寿洲 王亚玲 申亚梅 |
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作者单位: | 1. 浙江农林大学 风景园林与建筑学院, 杭州 311300; 2. 浙江农林大学 浙江省园林植物种质资源创新与利用重点实验室, 杭州 311300; 3. 仙湖植物园, 广东 深圳 518004; 4. 西安植物园, 西安 710061 |
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基金项目: | 浙江省“十四五”育种专项花卉协作组项目(2021C02071-3)[Supported by the Key Scientific and Technological Grant of Zhejiang for Breeding New Agricultural Varieties(2021C02071-3)]。 |
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摘 要: | 为筛选紫玉兰‘红元宝’(Magnolia liliflora‘Hongyuanbao’)二次花芽分化阶段稳定表达的内参基因,该研究以‘红元宝’不同花芽分化时期的花芽和叶为材料,基于转录组数据,筛选出8个候选内参基因,即泛素酶基因(UBC)、肌动蛋白(ACT)、微管蛋白β链(β-TUB)、微管蛋白β-5链(β-TUB5)、微管蛋白α-3链(α-TUB3)、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC)、酰基载体蛋白2(ACP2)、酰基载体蛋白3(ACP3)。运用Primer Premier 5设计引物,简单克隆和熔解曲线验证引物特异性;利用qRT-PCR技术检测各个候选内参基因的表达情况,结合GeNorm、NormFinder、BestKeeper软件和RefFinder在线工具综合评估其表达稳定性,并通过目的基因TFL1的表达分析验证其可靠性。结果表明:(1)8个候选内参基因条带位置正确,熔解曲线呈单一峰,说明引物特异性良好。(2)β-TUB、β-TUB5和α-TUB3是‘红元宝’不同花芽分化时期较为稳定的内参基因,而UBC和ACT为稳定性最低的内参基因。(3)β-TUB5、α-TUB3、β-TUB及其组合的相对表达量趋于一致,而ACT和UBC并未对目的基因的表达量进行有效的标准化。因此,β-TUB、β-TUB5和α-TUB3可作为‘红元宝’二次花芽分化研究中稳定表达的内参基因。该研究结果将为木兰属植物二次成花分子调控机制研究提供依据。
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关 键 词: | 紫玉兰 内参基因 两次成花 QRT-PCR 微管蛋白基因 |
收稿时间: | 2021-05-29 |
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