| 金黄色葡萄球菌arl双组分信号转导系统受体蛋白ArlS_(CA)的表达、纯化及活性研究 |
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| 引用本文： | 王路路,权春善,许永斌,陈金利,吴懿,王冠天,董悦生.金黄色葡萄球菌arl双组分信号转导系统受体蛋白ArlS_(CA)的表达、纯化及活性研究[J].中国生物工程杂志,2017,37(11):52-58. |
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| 作者姓名： | 王路路 权春善 许永斌 陈金利 吴懿 王冠天 董悦生 |
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| 作者单位： | 1. 大连理工大学环境与生命学院 大连 116024;2. 大连民族大学生物技术与资源利用教育部重点实验室 大连 116600;3. 大连民族大学生命科学学院 大连 116600 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（21272031，21372037）、中央高校基本科研业务费专项资金（DC201502020201）资助项目 |
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| 摘 要： | 金黄色葡萄球菌是一类重要的病原菌,其毒力因子的表达及分泌过程由多种双组分信号转导系统(two component signal transduction system,TCSTS)共同调控,其中ArlRS双组分信号转导系统与细菌的生长和分裂密切相关。ArlRS双组份系统的信号传递通过组氨酸激酶ArlS磷酸化实现,ArlS的胞内域被认为是调控毒力因子表达的重要功能域,以ArlS蛋白的胞内域部分即ArlS_(CA)为目标蛋白进行相关的活性研究。首先,构建pProEX-HTa-arls和pProEX-HTa-arlr重组质粒,对目的蛋白进行诱导表达。其次,利用金属离子螯合层析、离子交换层析以及凝胶过滤层析方法对目的蛋白进行分离纯化,纯化后的ArlR蛋白纯度可达98%,产量约为25mg/L;纯化后的ArlS蛋白纯度可达90%,产量约为15mg/L。圆二色谱检测结果显示纯化后的目的蛋白有完整的二级结构,体外磷酸化结果显示,ArlS蛋白具有激酶活性,自磷酸化后可以将磷酸基团转移给反应调控蛋白ArlR。最后,利用定点突变的方法,构建了418位和420位氨基酸残基突变的表达载体pProEX-HTa-ArlS_(CAG418A)和pProEX-HTa-ArlS_(CAG420A)。ArlS_(CAG418A)和ArlS_(CAG420A)蛋白不具有激酶活性,说明418位和420位氨基酸残基在ArlS蛋白的自磷酸过程中起着关键作用。
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| 关 键 词： | ArlSCA 蛋白质纯化 金黄色葡萄球菌 激酶活性 |
| 收稿时间： | 2017-04-19 |
Expression,Purification and Functional Assay of ArlSCA from Staphylococcus aureus |
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| WANG Lu-lu,QUAN Chun-shan,XU Yong-bin,CHEN Jin-li,WU Yi,WANG Guan-tian,DONG Yue-sheng.Expression,Purification and Functional Assay of ArlSCA from Staphylococcus aureus[J].China Biotechnology,2017,37(11):52-58. |
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| Authors: | WANG Lu-lu QUAN Chun-shan XU Yong-bin CHEN Jin-li WU Yi WANG Guan-tian DONG Yue-sheng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ArlSCA Kinase activity Staphylococcus aureus Purification |
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