| 抗病毒蛋白RC28在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达及活性比较 |
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| 引用本文： | 胡立强,郑文,钟艺,杜丹,杨浩,龚萌. 抗病毒蛋白RC28在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达及活性比较[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(1): 14-20. DOI: 10.13523/j.cb.20170103 |
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| 作者姓名： | 胡立强 郑文 钟艺 杜丹 杨浩 龚萌 |
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| 作者单位： | 四川大学华西医院 华西-华盛顿线粒体与代谢研究中心 成都 610041 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金资助项目（30900244） |
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| 摘 要： | RC28蛋白是从野生蕈类皱盖罗鳞伞中分离得到的新型抗病毒蛋白。前期通过3'-RACE方法,从皱盖罗鳞伞总RNA中克隆获得包含RC28编码区的c DNA,并通过TA克隆获得质粒p MD18-T-RC28。以该质粒为模板,设计特异性引物,PCR扩增RC28片段,分别插入大肠杆菌表达载体p ET28a(+)和毕赤酵母表达载体p PIC9K中,形成在N端表达组氨酸标签的重组RC28表达粒体。将这两种RC28表达质粒转化各自的宿主菌后,筛选阳性克隆,构建稳定表达体系。诱导表达后,用SDS-PAGE电泳和Western blot分析RC28的表达情况。放大表达体系后用Ni-NTA柱纯化获得RC28蛋白,并用MTT法测试重组表达蛋白质的抗病毒活性。在实验条件下,大肠杆菌和毕赤酵母中均能表达可溶性重组RC28,纯化后蛋白质得率分别是3.5mg/L发酵液及0.2mg/L发酵液。但抗病毒活性实验表明,大肠杆菌体系表达的RC28蛋白活性较差,而毕赤酵母系统表达的RC28蛋白的抗病毒活性与天然蛋白接近。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 毕赤酵母 表达纯化 抗病毒RC28 |
| 收稿时间： | 2016-08-22 |
Comparison of Expression and Activity of Antiviral Protein RC28 in Escherichia coli and Pichia pastoris |
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| HU Li-qiang,ZHENG Wen,ZHONG Yi,DU Dan,YANG Hao,GONG Meng. Comparison of Expression and Activity of Antiviral Protein RC28 in Escherichia coli and Pichia pastoris[J]. China Biotechnology, 2017, 37(1): 14-20. DOI: 10.13523/j.cb.20170103 |
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| Authors: | HU Li-qiang ZHENG Wen ZHONG Yi DU Dan YANG Hao GONG Meng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Protein expression and purification RC28 antiviral protein Escherichia coli expression system Pichia yeast expression system |
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