| 来源于红球菌胆固醇氧化酶ChOG的异源表达、纯化及催化反应结构分析 |
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| 引用本文： | 张玉富,王建文,李松涛,朱张亮,路福平,毛淑红,秦慧民.来源于红球菌胆固醇氧化酶ChOG的异源表达、纯化及催化反应结构分析[J].中国生物工程杂志,2017,37(6):43-49. |
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| 作者姓名： | 张玉富 王建文 李松涛 朱张亮 路福平 毛淑红 秦慧民 |
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| 作者单位： | 1. 天津科技大学生物工程学院 天津 300457;2. 天津科技大学工业发酵微生物教育部重点实验室 天津 300457;3. 工业酶国家工程实验室 天津 300457 |
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| 基金项目： | 天津市科技支撑计划（14ZCZDSY00012）、国家高技术研究发展计划项目（2011AA02A211-06）、国家自然科学基金（21206127）资助项目 |
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| 摘 要： | 胆固醇氧化酶是胆固醇代谢过程中的关键酶,临床上用胆固醇氧化酶作为检测血清胆固醇含量的应用潜力巨大。将来源于红球菌Rhodococcus ruber的胆固醇氧化酶Ch OG,分别转化到大肠杆菌宿主BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中,在不同条件下进行诱导表达,结果表明:BL21(DE3)菌株在诱导温度为16℃、IPTG浓度为0.1 mmol/L时,Ch OG可溶性表达量最高(0.49 mg/ml)。Ch OG的最适反应温度为30℃,最适反应p H为7.5。最适反应条件下,酶活性达到8.0 U/mg。利用TLC、HPLC对Ch OG催化产物胆甾-4-烯-3-酮进行了鉴定分析。三维结构及定点突变分析表明Glu406及Arg408、Glu261在进行胆固醇C3羟基的脱氢、质子传递,以及底物异构化方面发挥着重要作用。
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| 关 键 词： | 分离纯化 结构分析 酶活力测定 ChOG 胆固醇氧化酶 |
| 收稿时间： | 2016-12-16 |
The Expression,Purification and Structural Analysis of Cholesterol Oxidase ChOG |
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| ZHANG Yu-fu,WANG Jian-wen,LI Song-tao,ZHU Zhang-liang,LU Fu-ping,MAO Shu-hong,QIN Hui-min.The Expression,Purification and Structural Analysis of Cholesterol Oxidase ChOG[J].China Biotechnology,2017,37(6):43-49. |
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| Authors: | ZHANG Yu-fu WANG Jian-wen LI Song-tao ZHU Zhang-liang LU Fu-ping MAO Shu-hong QIN Hui-min |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | ChOG Structural analysis Activity assay Cholesterol oxidase |
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