| 杂合β-甘露聚糖酶AuMan5A~(loop)的H321对其酶学性质的影响 |
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| 引用本文： | 李雪晴,袁风娇,程建青,董运海,李剑芳,邬敏辰.杂合β-甘露聚糖酶AuMan5A~(loop)的H321对其酶学性质的影响[J].中国生物工程杂志,2017,37(2):48-53. |
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| 作者姓名： | 李雪晴 袁风娇 程建青 董运海 李剑芳 邬敏辰 |
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| 作者单位： | 1. 江南大学食品学院 无锡 214122;
2. 江南大学无锡医学院 无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目（31271811） |
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| 摘 要： | 目的:将loop置换杂合β-甘露聚糖酶AuMan5A~(loop)的H321突变回野生型酶AuMan5A对应的Gly,以分析杂合酶的酶学性质与H321的相关性。方法:采用大引物PCR技术将AuMan5A~(loop)基因(Auman5Aloop)编码H321的密码子CAC突变为Gly的GGT,构建突变酶基因Auman5A~(loop/H321G);借助表达质粒pPICZαA将该突变酶基因在Pichia pastoris GS115中实施表达,并分析重组表达产物AuMan5A~(loop) H321G的酶学性质。结果:AuMan5A~(loop/H321G)置换前后的最适温度T_(opt)均为75℃,高于AuMan5A的65℃;AuMan5A~(loop/H321G)在70℃的半衰期t_(1/2)~(70)为300 min,介于AuMan5A(10 min)和AuMan5A~(loop)(480 min)之间;AuMan5A~(loop/H321G)比活性分别为AuMan5A和AuMan5A~(loop)的12.8和1.43倍;催化效率k_(cat)/K_m为后两者的14.1和1.12倍。结论:通过H321G置换及对3种酶的温度特性、比活性和催化效率的测定及比较,证实了H321对AuMan5A~(loop)的酶学性质有一定的影响。
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| 关 键 词： | &beta 杂合酶 定点突变 -甘露聚糖酶 突变酶 酶学性质 |
| 收稿时间： | 2016-07-15 |
Effect of Amino Acid H321 on the Enzymatic Properties of Hybrid β-Mannanase AuMan5Aloop |
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| LI Xue-qing,YUAN Feng-jiau,CHENG Jian-qing,DONG Yun-hai,LI Jian-fang,WU Min-chen.Effect of Amino Acid H321 on the Enzymatic Properties of Hybrid β-Mannanase AuMan5Aloop[J].China Biotechnology,2017,37(2):48-53. |
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| Authors: | LI Xue-qing YUAN Feng-jiau CHENG Jian-qing DONG Yun-hai LI Jian-fang WU Min-chen |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | β-Mannanase Enzymatic properties Hybrid enzyme Site-directed mutagenesis Mutant enzyme |
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