| 单细胞PCR体系的建立及其在CRISPR/Cas9靶点活性检测中的应用 |
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| 引用本文： | 徐振宇,任红艳,毕延震,郑新民,李莉,张佳兰.单细胞PCR体系的建立及其在CRISPR/Cas9靶点活性检测中的应用[J].中国生物工程杂志,2017,37(2):74-80. |
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| 作者姓名： | 徐振宇 任红艳 毕延震 郑新民 李莉 张佳兰 |
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| 作者单位： | 1. 长江大学动物科学学院 荆州 434025;
2. 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 动物胚胎工程与分子育种湖北省重点实验室 武汉 430064 |
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| 基金项目： | 转基因生物新品种培育重大专项（2016ZX08006001-005，2016ZX08006002-006，2016ZX08010003-006）、湖北省农业科技创新中心（2016-620-000-001-027）、湖北省科技支撑计划（2014BBB010）资助项目 |
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| 摘 要： | 单细胞PCR是以单个细胞所含的DNA或RNA为模板进行扩增,因此其模板的制备是影响整个反应成功与否的关键因素。利用三种不同蛋白酶K细胞裂解液(SDS细胞裂解液、NP-40细胞裂解液、Tween-20细胞裂解液)分别对体外培养成熟的单个猪卵母细胞进行裂解,并直接作为模板进行PCR扩增,结果表明:NP-40细胞裂解液制备的模板质量最好,其扩增效率为95%;其次为Tween-20细胞裂解液,其扩增效率为65%;SDS细胞裂解液产物中未检测到阳性条带。结合显微注射技术对sgRNA靶点活性进行检测,结果表明利用单细胞PCR结合显微注射的方法,在受精卵内对CRISPR/Cas9靶点活性进行检测确实可行,检测结果真实可靠。
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| 关 键 词： | 基因修饰动物 细胞裂解液 靶点活性检测 单细胞PCR |
| 收稿时间： | 2016-08-03 |
Establishment of the Single-cell PCR System and Its Application in the Target-activity Detection of CRISPR/Cas9 System |
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| XU Zhen-yu,REN Hong-yan,BI Yan-zhen,ZHENG Xin-min,LI Li,ZHANG Jia-lan.Establishment of the Single-cell PCR System and Its Application in the Target-activity Detection of CRISPR/Cas9 System[J].China Biotechnology,2017,37(2):74-80. |
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| Authors: | XU Zhen-yu REN Hong-yan BI Yan-zhen ZHENG Xin-min LI Li ZHANG Jia-lan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Cell lysates Buffer Activity detection of target Genetic modified animal Single-cell PCR |
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