| 巴斯德毕赤酵母甘油转运体的发现及功能研究 |
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| 引用本文： | 战春君,李翔,刘国强,刘秀霞,杨艳坤,白仲虎. 巴斯德毕赤酵母甘油转运体的发现及功能研究[J]. 中国生物工程杂志, 2017, 37(7): 48-55. DOI: 10.13523/j.cb.20170710 |
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| 作者姓名： | 战春君 李翔 刘国强 刘秀霞 杨艳坤 白仲虎 |
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| 作者单位： | 1. 江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室无锡 214122;2. 江南大学工业生物技术教育部重点实验室无锡 214122;3. 江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室无锡 214122 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（面上项目）（31570034）、江苏省自然科学基金项目（BK20150148）、中央高校基本科研业务费专项资金（JUSRP51401A）资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:分离确认巴斯德毕赤酵母中甘油转运体并初步研究其功能。方法:通过生物信息学方法从NCBI数据库中查找可能的甘油转运体(gt1,GeneID:8197545),并通过DAS软件对其跨膜结构域进行预测。通过PCR方法扩增该基因并将其与EGFP融合克隆到pPICZ B及pRS424载体进行亚细胞定位;同时将其与pRS424载体连接后电转到粟酒裂殖酵母中进行异源表达确定其功能;通过同源重组敲除gt1基因并在不同培养基中培养测定aox1基因表达量。结果:生物信息学显示与酿酒酵母中已经证明的甘油转运体(sugar transporter 1,stl1)类似,GT1蛋白同样为具有疏水结构域的跨膜蛋白,同时亚细胞定位结果显示GT1蛋白定位于细胞膜上,包含有gt1基因的粟酒裂殖酵母可以在以甘油作为唯一碳源的培养基中生长而野生型不可以;在Δgt1突变体中aox1基因可以获得组成型表达。结论:分离并确认了巴斯德毕赤酵母中的甘油转运体GT1,并初步证明其与aox1基因甘油阻遏相关。
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| 关 键 词： | 巴斯德毕赤酵母 甘油转运体 亚细胞定位 甘油阻遏 同源重组 |
| 收稿时间： | 2017-02-23 |
Identification of Glycerol Transporter in Pichia pastoris and Function Research |
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| ZHAN Chun-jun,LI Xiang,LIU Guo-qiang,LIU Xiu-xia,YANG Yan-kun,BAI Zhong-hu. Identification of Glycerol Transporter in Pichia pastoris and Function Research[J]. China Biotechnology, 2017, 37(7): 48-55. DOI: 10.13523/j.cb.20170710 |
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| Authors: | ZHAN Chun-jun LI Xiang LIU Guo-qiang LIU Xiu-xia YANG Yan-kun BAI Zhong-hu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Glycerol repression Homologous recombination Subcellular localization Glycerol transporter Pichia pastoris |
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