密码子优化后的αB-晶状体蛋白基因毕赤酵母重组质粒的构建及表达的初步研究 |
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引用本文: | 冯雪,高香,牛纯青,刘堰.密码子优化后的αB-晶状体蛋白基因毕赤酵母重组质粒的构建及表达的初步研究[J].中国生物工程杂志,2017,37(7):42-47. |
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作者姓名: | 冯雪 高香 牛纯青 刘堰 |
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作者单位: | 西南大学生命科学学院 重庆 400715 |
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摘 要: | αB-晶状体蛋白属于小热休克蛋白家族,具有分子伴侣活性。在阿尔茨海默病大脑中,星形胶质细胞表达的αB-晶状体蛋白明显上调,并且这些上调的αB-晶状体蛋白紧密地分布在β-淀粉样蛋白沉积周围。为了在分子水平上研究胞外αB-晶状体蛋白在阿尔茨海默病中的作用机制,需要获得大量具有生物学活性的αB-晶状体蛋白。根据毕赤酵母密码子偏好性对人αB-晶状体蛋白基因进行优化,并在目的基因3'端加上6个组氨酸标签,优化后的基因克隆到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体p PIC9K上;电转入毕赤酵母GS115中;优化确定最佳表达条件为:BMGY与BMMY的转接比为2∶1,表达时间为72h,甲醇补加终浓度为0.5%;经Western blotting鉴定,获得20kDa的目的蛋白,以及18.6kDa和13.1kDa两个蛋白质片段,重组目的蛋白出现了部分降解,纯化获得20kDa目的蛋白;利用胰岛素还原法测定该片段具有分子伴侣活性,为进一步研究外源αB-晶状体蛋白在阿尔茨海默病中对星形胶质细胞的保护机制奠定基础。
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关 键 词: | 密码子优化 分子伴侣活性 表达优化 巴斯德毕赤酵母 αB-晶状体蛋白基因 |
收稿时间: | 2017-01-04 |
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